【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测方法，具体涉及一种黑米中花青素含量的测定方法及其应用。
技术介绍
1、黑米富含营养价值和药用价值很高的花青素。在食品、化妆、保健品等领域广泛应用，市场前景广阔，因此较多的研究集中于黑米花青素的生理合成、遗传调控、栽培技术开发以及高花青素含量品种的选育。这些研究均依赖于花青素的快速准确检测，黑米花青素的充分提取及准确检测能有效反映黑米花青素的真实含量，可推动黑米花青素相关科学研究的发展，可为黑米花青素的开发和应用奠定重要基础。
2、目前，花青素常见的测定方法有分光光度比色法和高效液相色谱法；其中分光光度比色法又分为单一ph、ph示差法；现有的检测方法存在以下问题：
3、1、高效液相色谱法，对仪器设备要求较高，操作复杂，单个样品测定时间长，可以实现不同类型花青素的检测，但不适应于花青素总含量的快速检测。
4、2、ph示差法，虽然能去掉非花青素物质如叶绿素、类胡萝卜素等有色物质的干扰，但调控ph操作复杂，结果不稳定，不适应于研究过程中产生的大量样品的快速检测。
5、3、单一ph检测花青素易受叶绿素、类胡萝卜素等有色物质的影响，但黑米有色物质相对单一，主要成分为矢车菊素-3-葡萄糖苷，除花青素外的其他有色物质含量很小，不构成对实验结果的影响。刘长姣等采用矢车菊素-3-葡萄糖苷作为标准品，采用单一ph分光光度法进行了黑米花青素的检测；另外，中华人民共和国行业标准ny/t 832-2004(黑米)记录了单一ph分光光度法测定花青素总含量的方法。
6、但是目前关于单
7、基于此，亟需一种能够准确测定黑米中花青素总含量的方法。
技术实现思路
1、为了解决现有花青素含量测定过程中，高温提取，提取条件和提取溶剂成分交互作用导致花青素提取不完全，分解严重的问题，本专利技术的目的之一是提供一种黑米中花青素含量的测定方法。
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
3、步骤1、在30～35℃下用纤维素酶溶液对黑米进行酶解处理；
4、步骤2、酶解后加入由乙醇和混合酸组成的提取液，然后在避光密封、20～25℃的条件下震荡18～24h，经离心后获得待检测样品；其中，乙醇的浓度为90～96％，混合酸由盐酸、柠檬酸和阿魏酸组，提取液中的h+浓度为0.065mol/l～0.259mol/l；
5、步骤3、以矢车菊-3-o-葡萄糖苷作为标准品，将其溶解在提取液中并形成不同浓度的标准液，测定不同浓度的标准液在535nm波长处测其吸光值，经回归分析获得标准曲线；
6、步骤4、测定待检测样品在535nm波长处的吸光值，然后减去不加黑米对照组的吸光值，利用吸光差值根据步骤3中标准曲线计算出黑米中花青素的含量。
7、在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进：
8、进一步地，步骤1中黑米为黑米粉，纤维素酶溶液的浓度为26～34u/ml，酶解处理时间为28～37min。
9、进一步地，黑米粉与提取液的料液比为1:20～40。
10、进一步地，待检测样品于2～4℃下保存，并于24h内完成对花青素含量的测定。
11、进一步地，提取液中盐酸、柠檬酸和阿魏酸的质量分数分别为0.1～0.6％、0.1～0.4％、0.05～0.1％。
12、本专利技术的目的之二是将目的之一中的测定方法用于测定花青素的含量。
13、本专利技术具有以下有益效果：
14、本专利技术是基于乙醇的浓度、提取液酸度、提取温度以及提取时间之间相互作用，在最大程度对黑米中的花青素进行充分提取的同时尽可能降低花青素的分解，进而提高对花青素总含量测定的准确性。同时，根据后期的测试分析可知，本专利技术中的测定方法对花青素含量的测定值相对于标准法测(中华人民共和国行业标准ny/t 832-2004(黑米))高至少19.9％左右，最高可达108.4％；并且根据后期专利技术人进行的box-behnken实验发现，测试获得的模型预测结果为4.268mg/g，而用最优条件测定黑米(紫籼稻)花青素，重复3次，得到的花青素含量为3.84mg/g，与理论值相差0.428mg/g，进一步说明本专利技术中的检测方法提高了对黑米总含量测定的准确性。
15、此外，本专利技术中的方法实现了对花青素的充分提取以及准确检测，利于推动黑米花青素相关研究的发展；并且本专利技术中的方法还有快速检测的特点。
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1.一种黑米中花青素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤1中黑米为黑米粉，所述纤维素酶溶液的浓度为26～34U/ml，所述酶解处理时间为28～37min。
3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述黑米粉与提取液的料液比为1:20～40。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述待检测样品于2～4℃下保存，并于24h内完成对花青素含量的测定。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述提取液中盐酸、柠檬酸和阿魏酸的质量分数分别为0.1～0.6％、0.1～0.4％、0.05～0.1％。
6.权利要求1～5任一项所述测定方法在测定花青素含量中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种黑米中花青素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤1中黑米为黑米粉，所述纤维素酶溶液的浓度为26～34u/ml，所述酶解处理时间为28～37min。
3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述黑米粉与提取液的料液比为1:20～40。
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