【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种精胺的比色快速检测方法，特别是基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法。
技术介绍
1、精胺(spm)是一种化学物质，被发现能与常存在于肉制品、烟熏食品中的亚硝基化合物发生反应，产生亚硝胺等致癌物。另外，精胺也被发现能够抑制组胺和酪胺相关代谢酶的活性，组胺和酪胺存在于一些食物中，如发酵食品、奶制品和某些蔬菜，正常情况下，人体会通过代谢酶将其分解，防止其在体内积累。但是，当精胺干扰了这些代谢酶的活性时，组胺和酪胺可能会在体内累积，引发人体的中毒反应。因此，迫切需要建立快速检测食品中spm的方法，避免spm含量较高的食品被人们食用。目前针对spm的快检方法主要是利用贵金属纳米粒子aunps和agnps作为比色探针，但贵金属纳米粒子的稳定性易受到高盐粒子和阳离子聚合物的影响，从而影响检测结果的准确性。此外，一些比色法使用有毒染料作为传感材料，容易对环境的质量和实验人员的安全造成威胁。由于目前针对spm的快速比色检测方法仍存在挑战，因此，迫切需要寻找一种新的传感信号材料来构建spm的比色快检方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于，提供一种基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法。其具有肉眼可辨、操作简便、检测快速、成本低廉、选择性好、安全绿色等优势，可广泛应用于实际食品中spm的快速检测。
2、本专利技术的技术方案：基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，包括以下步骤：
3、a：绘制精胺浓度
4、b：根据精胺浓度与吸光度变化量标准曲线建立有关精胺浓度与吸光度值之间相互关系的线性回归方程；
5、c：制备未知精胺浓度的待测溶液，得c品；
6、d：取c品进行吸收光谱扫描，测定其在510nm波长处的吸光度值，计算c品与空白对照溶液a2品的吸光度差值，将该吸光度差值代入线性回归方程中，即可获得c品中精胺的浓度。
7、前述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法中，所述步骤a中，绘制精胺浓度与吸光度值变化量标准曲线的具体方法为：
8、a1：取多支刻度离心管，每支刻度离心管加入一定浓度的mn3o4纳米颗粒和一种已知浓度的精胺标准液，混匀后再孵育，然后加入底物2,4-dp和hepes缓冲液，最后加入4-aap即可制备得到待测组，为a1品；
9、a2：取1支刻度离心管，按照a1的方法用超纯水替代已知浓度的精胺标准液，制备得到a2品；
10、a3：取a1品和a2品，分别用酶标仪测定其在510nm波长处的吸光度值；
11、a4：根据吸光度值，将a2品与不同浓度的a1品之间的吸光度差值作为纵坐标，精胺浓度作为横坐标绘制得到靶标浓度与吸光度变化量的标准曲线。
12、前述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法中，所述步骤b中，当精胺浓度c为0.3μg·ml-1≤c≤2μg·ml-1时，其浓度与吸光度值变化量之间相互关系的回归方程为：y＝0.17916c-0.10049；y为吸光度差值(δa)＝a2品的吸光度值-含靶标精胺的待测品的吸光度值。
13、前述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法中，所述步骤c中，制备未知靶标精胺浓度的待测溶液c品的具体方法为：用实际样液替代已知浓度的靶标精胺标准液，按照a1的方法即可制备得到未知靶标精胺浓度的待测溶液，为c品。
14、前述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法中，所述花状mn3o4纳米颗粒溶液的浓度为1.25mg·ml-1；2,4-dp溶液的浓度为25mg·ml-1；hepes缓冲液为15mm，ph 7.5；4-aap溶液的浓度为1mg·ml-1。
15、前述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法中，所述的a1品、a2品或c品制备过程为：在离心管中加入mn3o4溶液和spm充分混匀，于30℃孵育10min备用，然后加入2,4-dp溶液，再依次加入hepes缓冲液和4-aap混合液；
16、所述的a1品、a2品或c品制备过程中：花状mn3o4纳米颗粒、精胺标准液或实际样液、2,4-dp溶液加入量均为10μl；4-aap溶液的用量为30μl；hepes缓冲液溶液的用量为：440μl。
17、前述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法中，所述花状mn3o4纳米颗粒溶液的制备方法为：将1.0g、6.3mm的kmno4溶解于500ml超纯水中并剧烈搅拌30min，随后将10ml油酸加入溶液中并在28℃下持续搅拌5h，得到的棕黑色沉淀物用超纯水洗涤，随后用乙醇除去沉淀中残留的起始物质，处理后的沉淀物置于80℃下干燥10h，得到颗粒状物质，随后在200℃空气中煅烧5h，得到单分散的纳米颗粒。
18、本专利技术的有益效果：与现有技术相比，本方法的检测原理为：本方法利用具有模拟漆酶活性的花状mn3o4纳米颗粒作为比色探针，并首次发现spm可以抑制纳米颗粒的漆酶活性，因而研制了基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的spm比色快检方法。花状mn3o4纳米颗粒可以催化溶解氧产生超氧阴离子(·o2-)，从而氧化酚类底物2,4-dp产生无色的醌类化合物，后者与4-aap反应生成红色产物。当spm加入后，其通过静电力吸附在纳米颗粒表面，占据材料活性位点，导致花状mn3o4与2,4-dp之间的电子转移减少，从而阻碍了纳米颗粒催化反应体系中的溶解氧产生·o2-，使得纳米颗粒的漆酶活性受到抑制，反应溶液的颜色呈现浅粉色。并且所构建的比色传感器的溶液颜色变化程度与spm浓度正相关，因而该方法可以用于实际样本中spm的快速检测。所研制的比色检测方法平均回收率在88.6-95.3％以内，相对标准差(rsd)范围为4.14-5.4％，其检测性能与高效液相色谱法(hplc)分析结果相似。该方法在亚精胺(spd)、组胺(his)、尸胺(cad)、腐胺(put)、色胺(try)、酪胺(tyr)，精氨酸(arg)、脯氨酸(pro)、赖氨酸(lys)等干扰性可以特异性地检测精胺。所提出的快速检测方法具有检测灵敏度高，特异性强，且操作简单快速，肉眼可辨，可以广泛应用于实际食品样本中spm的快速检测。
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1.基于花状Mn3O4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于花状Mn3O4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述步骤A中，绘制精胺浓度与吸光度值变化量标准曲线的具体方法为：
3.根据权利要求1所述的基于花状Mn3O4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述步骤B中，当精胺浓度C为0.3μg·mL-1≤C≤2μg·mL-1时，其浓度与吸光度值变化量之间相互关系的回归方程为：y＝0.17916C-0.10049；
4.根据权利要求2所述的基于花状Mn3O4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述步骤C中，制备未知靶标精胺浓度的待测溶液C品的具体方法为：用实际样液替代已知浓度的靶标精胺标准液，按照A1的方法即可制备得到未知靶标精胺浓度的待测溶液，为C品。
5.根据权利要求2所述的基于花状Mn3O4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述花状Mn3O4纳米颗粒溶液的浓度为1.25mg·mL-1；2,4-DP溶液的浓度为
6.根据权利要求2所述的基于花状Mn3O4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述的A1品、A2品或C品制备过程为：在离心管中加入Mn3O4溶液和SPM充分混匀，于30℃孵育10min备用，然后加入2,4-DP溶液，再依次加入HEPES缓冲液和4-AAP混合液；
7.根据权利要求2所述的基于花状Mn3O4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述花状Mn3O4纳米颗粒溶液的制备方法为：将1.0g、6.3mM的KMnO4溶解于500mL超纯水中并剧烈搅拌30min，随后将10mL油酸加入溶液中并在28℃下持续搅拌5h，得到的棕黑色沉淀物用超纯水洗涤，随后用乙醇除去沉淀中残留的起始物质，处理后的沉淀物置于80℃下干燥10h，得到颗粒状物质，随后在200℃空气中煅烧5h，得到单分散的纳米颗粒。
...【技术特征摘要】
1.基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述步骤a中，绘制精胺浓度与吸光度值变化量标准曲线的具体方法为：
3.根据权利要求1所述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述步骤b中，当精胺浓度c为0.3μg·ml-1≤c≤2μg·ml-1时，其浓度与吸光度值变化量之间相互关系的回归方程为：y＝0.17916c-0.10049；
4.根据权利要求2所述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述步骤c中，制备未知靶标精胺浓度的待测溶液c品的具体方法为：用实际样液替代已知浓度的靶标精胺标准液，按照a1的方法即可制备得到未知靶标精胺浓度的待测溶液，为c品。
5.根据权利要求2所述的基于花状mn3o4纳米颗粒模拟漆酶活性的精胺比色快检方法，其特征在于：所述花状mn3o...
【专利技术属性】
技术研发人员：牛晓娟，吴远根，魏溢，李鲁涛，
申请(专利权)人：贵州师范大学，
类型：发明
国别省市：
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