一种简便的Western Blot快速转膜方法技术

本发明专利技术公开了一种简易的WB快速转膜方法，具体涉及一种简易的转膜装置的搭建，即借助冰槽和微型水泵或磁力搅拌器，在高电流条件下进行转膜。本发明专利技术与目前常见的转膜方法相比，缩短了转膜所需时长，提高了缓冲液在转膜时的散热能力，克服了传统湿转耗时长，效率低的缺陷，在不改变Tris‑Gly转膜液成分的条件下增加散热，提高转膜效率，达到了可在10‑30min完成转膜，对western blot实验具有优化效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，涉及一种高效简易的蛋白转膜方法。

技术介绍

1、western blot(蛋白免疫印迹法)是一种分子生物学、生物化学和免疫遗传学研究中常用的分离和鉴定蛋白质的技术，广泛应用于检测蛋白水平的表达。其步骤主要包含蛋白样品的制备，测定蛋白含量，电泳，转膜，孵育一抗，孵育二抗，成像反应。然而该实验步骤较多，实验周期较长。转膜是western blot中的必要环节，因为凝胶易碎，膜具有更好的处理能力，此外抗体大分子也可更好地靶向膜上的蛋白质，便于进行后续孵育抗体和检测蛋白。常见的转膜方法分为传统湿式(电泳槽转膜)，半干式转膜和干式转膜。传统湿式转膜方法效率高，但费时费力。但是，半干式转膜系统转膜大分子量蛋白质(＞300kda)的效率较低。传统湿转需要在大量转膜液中进行，在转膜期间，转膜系统的发热会导致“三明治”电阻下降。因“三明治”被加热及其导致的电阻变化可能引发转膜效率不均一，或者缓冲液失去缓冲能力，甚至凝胶融化。目前湿转标准方法为恒流200-400ma或恒压70-120v。恒电压转膜时，由于加热引起的电阻降低，湿转系统中的电流会增加，存在过热本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种简便的Western Blot快速转膜方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.一种简便的Western Blot快速转膜装置搭建，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利1所述的简便的Western Blot快速转膜方法，其特征在于，步骤(1)所述Tris-Gly转膜液充分冷却，使其使用时温度接近于0℃。

4.根据权利2所述的简便的Western Blot快速转膜装置的搭建，其特征在于，步骤(3)所述，冰槽内冰水温度应接近于0℃。

5.根据权利2所述的简便的Western Blot快速转膜装置的搭建，其特征在于，步骤(2)小型循环水泵...

【技术特征摘要】

1.一种简便的western blot快速转膜方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.一种简便的western blot快速转膜装置搭建，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利1所述的简便的western blot快速转膜方法，其特征在于，步骤(1)所述tris-gly转膜液充分冷却，使其使用时温度接近...

【专利技术属性】
技术研发人员：茆达干，李浩琳，裴晓蒙，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：