【技术实现步骤摘要】
【】本专利技术属于农业，特别涉及用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法。
技术介绍
0、
技术介绍
1、葡萄污果病俗称“溢糖性霉斑”，该病在果实成熟期开始发病，随果实成熟度提高其发病概率逐渐上升。该病由蚜虫莫氏黑粉菌(广西壮族自治区产区污果病的优势菌)等附生致病真菌引发，其症状表现为病果表皮呈现零星雪花状或放线状的白色、浅红色或灰白色霉斑，进而随病程发展逐渐形成大片污渍状病斑，果面的健康果粉随之丧失。虽然该病不会进一步引发果实的溃烂、落粒和品质劣变，但因此造成外观严重受损，同样导致果穗商品价值下降甚至丧失。据不完全统计，随着近十年广西壮族自治区内葡萄种植面积的迅速扩大，该病已经从零星散发逐渐加剧至连片多年多发，而在我国台湾、浙江、湖北等其它南方省份，也出现了面积较大、程度较重的发病报道，给种植户造成了严重损失。国内外对于葡萄污果病的防治一直以来未有过系统研究的报道，这导致在生产中污果病难防难治，无法实现有效防控。
2、对于植物微生物病害的防治通常采用化学、物理及生物防治相结合的办法，其中化学药剂防治针对性强、见效快，是综合防治技术体系的关键组成。通过药剂筛选试验找出针对性的药剂，是微生物病害有效防治的基础。但目前葡萄污果病病果样本需要通过在实验室恒温恒湿条件下，人工将病菌返接于巨峰或夏黑葡萄进行离体培养的方法制备，该方法存在所得病果样本均一性较差、成功率偏低、每批次制备病果样本量少、试验条件与田间实际发病条件差异巨大等缺陷，难以满足污果病防治药剂大规模筛选工作需要，这从根本上限制了
技术实现思路
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技术实现思路
1、本专利技术针对上述问题，提供一种用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法。本专利技术是在大田栽培条件下能够稳定、大批量制备葡萄污果病病果活体样本的技术方法，从根本上解决污果病防治药剂筛选工作缺乏足量试验对象的问题，有力促进葡萄污果病防治药剂的筛选和该病防治新技术的研发工作。
2、为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案是：
3、用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法，具体包括以下具体步骤：
4、(1)选择葡萄品种：
5、栽培品种选用圆叶葡萄(vitisrotundifolia)进行栽培对象；
6、(2)葡萄栽培与管理：采用常规水肥管理及花期病害防控栽培管理；每年1月下旬-2月中旬进行修剪，7月中旬至8月下旬果实陆续成熟期，即可提供长达近60天的药效试验窗口期；在栽培与管理中具体操作布局如下：
7、1)使用窄行距简易避雨棚，配合飞鸟架架式或平棚架架式进行栽培，简易避雨棚行距为2.2-2.5米；
8、2)在枝梢管理时，按每间隔3-5cm保留一条枝条的超高密度模式进行枝条管理；所有枝条在栽培过程中不进行摘除顶芽处理，使其生长出避雨棚棚面后，自然下垂至行间地面；
9、3)果实成熟期过量灌溉：观察到果实开始出现转色成熟后，每日定时用喷带进行喷淋灌溉，至排水沟底部出现积水为止，保持园区环境中空气相对湿度达80％以上；
10、(3)葡萄污果病活体样本培育：
11、从蚜虫莫氏黑粉菌菌株麦芽汁琼脂斜面上挑取一环菌体，在无菌超净工作台中接种于盛有100ml种子培养基的500ml三角摇瓶中，30℃，160r/min振荡培养36h后，将种子培养物按体积比5％的比例接种于二级培养基中，30℃，160r/min振荡培养48h后，将培养物稀释至106cfu/ml，均匀喷施接种于果穗，接种一周左右出现污果病症状即可作为葡萄污果病活体样本。
12、进一步说明，所述圆叶葡萄品种可为格威尔、弗雷尔、阿拉紫、诺贝尔或卡洛斯品种。
13、进一步说明，所述种子培养基的配方为10g/l葡萄糖，5g/l酵母浸粉，5g/l胰蛋白胨，1l纯水，ph自然，121℃灭菌20min。
14、进一步说明，所述二级培养基的配方为10g/l葡萄糖，0.5g/l酵母浸粉，5g/lcacl2,1l纯水，121℃灭菌20min。
15、进一步说明，所述常规水肥管理及花期病害防控栽培管理是参考tgxas175-2021团体标准《夏黑葡萄省力化栽培技术规程》的要求规范进行。
16、进一步说明，所述每日定时用喷带进行喷淋灌溉的时间为上午9-11时和下午2-4时。
17、本专利技术使用的蚜虫莫氏黑粉菌(moesziomycesaphidis)菌株购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心处(http://sales.china-cicc.org/)，菌株保藏编号：cicc32975；cicc自行分离，收藏时间：2013年1月21日。
18、与现有技术相比较，本专利技术具有以下有益效果：
19、本专利技术提供的方法与现有葡萄污果病制备方法相比，本专利技术的方法操作简便、为污果病防治药剂的筛选工作提供品质相对均一、与自然发病情况近似度高、供应充足稳定的活体试验对象。本专利技术解决了当前污果病天然样本发病程度一致性差、发病不稳定，人工制备污果病样本只能在实验室条件下离体小规模制备、与大田实际情况相似度差等缺陷，保障了污果病防治药剂的筛选工作能够在贴近生产实际的情况下开展，有力助力相关药剂的筛选进程。
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1.用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法，其特征在于，具体包括以下具体步骤：
2.据权利要求1所述的用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法，其特征在于，所述圆叶葡萄品种可为格威尔、弗雷尔、阿拉紫、诺贝尔或卡洛斯。
3.据权利要求1所述的用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法，其特征在于，所述种子培养基的配方为10g/L葡萄糖，5g/L酵母浸粉，5g/L胰蛋白胨，1L纯水，pH自然，121℃灭菌20min。
4.根据权利要求1所述的用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法，其特征在于，所述二级培养基的配方为10g/L葡萄糖，0.5g/L酵母浸粉，5g/LCaCl2,1L纯水，121℃灭菌20min。
5.根据权利要求1所述的用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法，其特征在于，所述常规水肥管理及花期病害防控栽培管理是参考TGXAS175-2021团体标准《夏黑葡萄省力化栽培技术规程》的要求规范进行。
6.根据权利要求
...【技术特征摘要】
1.用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法，其特征在于，具体包括以下具体步骤：
2.据权利要求1所述的用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法，其特征在于，所述圆叶葡萄品种可为格威尔、弗雷尔、阿拉紫、诺贝尔或卡洛斯。
3.据权利要求1所述的用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病病果活体样本大规模制备方法，其特征在于，所述种子培养基的配方为10g/l葡萄糖，5g/l酵母浸粉，5g/l胰蛋白胨，1l纯水，ph自然，121℃灭菌20min。
4.根据权利要求1所述的用于葡萄污果病防治药剂筛选的污果病...
【专利技术属性】
技术研发人员：李玮，黄秋凤，陈国品，曹慕明，黄羽，黄竟，管敬喜，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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