【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及重金属镉的快速检测，尤其是涉及一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条及其制备和应用。
技术介绍
1、工业化以及采矿和农药喷洒等人类活动的影响，大量的重金属镉被排放到环境中。镉通过水、土壤、大气等介质进入蔬菜、水果、谷物等农作物中，并在植物内部迁移和生物富集，这些受污染的农产品可被人体摄入。由于镉无法代谢并且容易富集，因此人体长期摄入受污染的农产品会导致肾功能损害和衰竭，骨骼系统障碍，并且可能具有致癌风险。因此，对蔬菜等农产品中的镉含量进行检测是非常必要的。
2、现有的重金属镉检测方法包括仪器法和快速检测法。仪器法检测时间长，需要大型仪器和专业技术人员，不适合现场快速检测。现场快速检测方法中，基于抗原抗体的免疫层析试纸条(lfia)具有特异性强、成本低、检测快、操作易等特点，在食品、医疗等各个领域被研究和应用的最为广泛。已公开的快速检测重金属镉方法包括：(1)电化学传感器法，如专利公开号cn115901733a公开了一种镉离子检测试纸制备及应用方法。该专利技术基于谷胱甘肽聚集诱导金加入镉离子后解除聚集的原理，利用产生的化学发光信号强弱的检测镉，该方法操作简单、灵敏度高、检出限低，但是该专利技术对样品前处理要求高，并未在蔬菜、肉类食品中的实际应用。再如专利公开号cn114674884a公开了一种用于小龙虾肉质中铅和镉离子的检测方法，检测时间短、易上手。但是该方法需要额外的电化学监测仪辅助，不适合用作大规模示范应用。(2)细胞生物传感器法，如专利公开号cn116333952a公开了一种对重金属镉敏感的细胞生物传感
3、影响试纸条灵敏度和条带的具体显色情况的关键决定因素是标记材料的种类和性质，微球是免疫层析标记中必不可少的原材料之一。免疫微球(immunomicrosphere)技术始于20世纪70年代中期，伴随着免疫检测、免疫吸附、细胞分离和培养等领域的技术进步而发展起来。免疫微球要求微球乳液密度高，粒子分散性好，悬浮性能好，吸附蛋白质的能力强。微球的吸附率直接关系到检测结果。
4、聚多巴胺(pda)是一种黑色素类似物，是由多巴胺单体通过氧化聚合制备而成的聚合物。近年来，研究者利用pda的优异性能和生物相容性，开发了多种基于pda的生物传感器，并且通过与其他材料的共价键结合获得了多功能复合标记材料。聚多巴胺纳米粒子(pda nps)最大的优点是制备方法简单，不需要多种仪器设备和药品试剂，且易于存放，降低了制备成本。目前，还没有将聚多巴胺-免疫层析试纸条(pda-lfia)应用于其他重金属检测，例如镉(cd)等。
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条的制备及应用，可以实现快速检测蔬菜类农产品中的重金属镉。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术提供一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其与pda免疫探针配合使用，包括：
4、聚氯乙烯(pvc)底板和黏贴在所述pvc底板上且从左至右依次衔接的样品垫、硝酸纤维素膜(nc膜)、吸收垫；
5、所述nc膜上固定有起检测作用的t线和起指控作用的c线，所述t线为镉与载体蛋白的偶联物，所述c线为羊抗鼠抗体；
6、所述吸收垫起吸水作用。
7、进一步的，所述pda免疫探针的制备方法具体包括以下步骤：
8、a1：制备pda微球：将乙醇、超纯水与氨水混合，搅拌均匀后加入盐酸多巴胺溶液，充分搅拌反应，离心，得到pda微球；
9、a2：制备pda免疫探针：将pda微球分散在超纯水中，得到pda溶液，将所述pda溶液与抗镉单克隆抗体溶液混合并孵育，再加入牛血清白蛋白(bsa)封闭液后继续孵育，离心，得到pda免疫探针。
10、更进一步的，在步骤a1中，所述乙醇、超纯水、氨水、盐酸多巴胺溶液的体积比为40：90：(1.5～4)：10。
11、更进一步的，在步骤a1中，所述氨水的含氨量为25％～27％。
12、更进一步的，在步骤a1中，所述盐酸多巴胺溶液的浓度为0.01～0.1g/ml。
13、更进一步的，在步骤a1中，所述pda微球的粒径为170～370nm.
14、更进一步的，在步骤a1中，所述搅拌的转速为100～400r/min，所述搅拌均匀的时间为10～60min，所述充分搅拌反应的时间为12～48h。
15、更进一步的，在步骤a1中，所述离心的转速为8000～12000r/min，所述离心的时间为5～30min。
16、更进一步的，在步骤a2中，所述pda微球与所述超纯水的质量体积比为0.1％～10％。
17、更进一步的，在步骤a2中，所述抗镉单克隆抗体溶液为抗cd2+-itcbe-cp单克隆抗体，由专利公开号cn113607951a中所示抗cd2+-itcbe-cp单克隆抗体的筛选得到，采用抗体稀释液稀释至0.1～5.0mg/ml。
18、更进一步的，在步骤a2中，所述pda免疫溶液、抗镉单克隆抗体溶液与bsa封闭液的体积比为100：(1～40)：(20～100)。
19、更进一步的，在步骤a2中，所述pda免疫溶液的浓度为0.1～100mg/ml。
20、更进一步的，在步骤a2中，所述bsa封闭液的质量体积比浓度为2％～10％。
21、更进一步的，所述的cp(载体蛋白)为ova(鸡卵白蛋白)、bsa或klh(钥孔血蓝蛋白)中的一种或多种。
22、更进一步的，在步骤a2中，所述孵育的温度4～25℃，所述孵育的时间为30～60min。
23、更进一步的，在步骤a2中，所述继续孵育的温度为4～25℃，所述继续孵育的时间为1～5h。
24、更进一步的，在步骤a2中，所述离心的转速为8000～12000r本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，其与PDA免疫探针配合使用，包括：
2.根据权利要求1所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，所述PDA免疫探针的制备方法具体包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，在步骤A1中，所述乙醇、超纯水、氨水、盐酸多巴胺溶液的体积比为40：90：(1.5～4)：10；
4.根据权利要求2所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，在步骤A2中，所述聚多巴胺微球与所述超纯水的质量体积比为0.1％～10％。
5.根据权利要求1所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，所述镉与载体蛋白的偶联物为Cd2+-ITCBE-CP；
6.根据权利要求1所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，所述羊抗鼠抗体浓度为0.1～0.80mg/mL。
7.如权利要求1～6任一所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的一种基
9.如权利要求1～6任一所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条的应用，其特征在于，应用于在蔬菜类农产品中快速检测重金属Cd，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条的应用，其特征在于，在步骤C1中，所述聚多巴胺免疫探针的稀释倍数为10～100倍，加入量为20～100μL，所述冻干的温度为-50～-30℃，所述冻干的时间为24～72h；
...【技术特征摘要】
1.一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，其与pda免疫探针配合使用，包括：
2.根据权利要求1所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，所述pda免疫探针的制备方法具体包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，在步骤a1中，所述乙醇、超纯水、氨水、盐酸多巴胺溶液的体积比为40：90：(1.5～4)：10；
4.根据权利要求2所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，在步骤a2中，所述聚多巴胺微球与所述超纯水的质量体积比为0.1％～10％。
5.根据权利要求1所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析试纸条，其特征在于，所述镉与载体蛋白的偶联物为cd2+-itcbe-cp；
6.根据权利要求1所述的一种基于聚多巴胺的镉免疫层析...
【专利技术属性】
技术研发人员：王元凤，徐乃丰，王珏，贾静泽，
申请(专利权)人：上海师范大学，
类型：发明
国别省市：
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