一种拟无枝酸菌突变株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种拟无枝酸菌突变株及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术利用CRISPR/Cas12a基因编辑系统成功对拟无枝酸菌CCTCC NO:M2011265中的香兰素脱氢酶基因(vdh)和4‑羟基‑3‑甲氧基苯甲酰基‑β‑羟基丙酰辅酶脱氢酶基因(phdB)进行无痕敲除，获得拟无枝酸菌ΔvdhΔphdB菌株在3L发酵罐中，发酵60小时产香兰素的达到20.4g/L，对底物阿魏酸摩尔转化率达90.5％表现出良好的工业应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种拟无枝酸菌突变株及其应用，属于基因工程。

技术介绍

1、香兰素是世界上最重要的香料之一，有“香料之王”的美誉，被广泛应用于食品，化工，医药，农业等方面。在食品方面，起到助香、增味的作用；在化工上，香兰素可用于牙膏、香皂、香水及各种化妆品，是制备各种卫生用品香料、化妆品的原料；在医药方面，香兰素是合成多种药物的重要原料；香兰素在农业上可以用作增产剂和催熟剂，还可以用来合成除草剂；另外，香兰素还可以用作杀菌剂、消泡剂、电镀添加剂等，由于其广泛的使用领域，国内外所生产出的香兰素远远不能满足目前的市场需求。市场上的香兰素主要分为合成香兰素和天然香兰素两种，其中合成香兰素占据市场的主导地位。合成香兰素的生产方式不断完善，有近10种化学合成方法，其市场份额超过90％。由于香荚兰的种植受气候的影响，产量有限，天然香兰素价格极其昂贵，超过化学合成法的100倍，每公斤价格约1000～4000美元。全球香兰素年总产量已达到2万吨，而我国香兰素的产量约占据全球总产量的70％。微生物转化法所用的微生物有多种，底物主要是可再生资源阿魏酸，天然底物经生物转化产生的香本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种拟无枝酸菌突变株，其特征在于，所述突变株为，敲除拟无枝酸菌的基因组中表达香兰素脱氢酶的基因和4-羟基-3-甲氧基苯甲酰基-β-羟基丙酰基CoA脱氢酶的基因。

2.根据权利要求1所述的拟无枝酸菌突变株，其特征在于，所述突变株是产香兰素的拟无枝酸菌为宿主细胞。

3.根据权利要求2所述的拟无枝酸菌突变株，其特征在于，所述表达香兰素脱氢酶的基因的序列如SEQ ID NO.1所示；所述4-羟基-3-甲氧基苯甲酰基-β-羟基丙酰基CoA脱氢酶的基因的序列如SEQ ID NO.2所示。

4.权利要求1～3任一所述拟无枝酸菌突变株的构建方法，其特征在于，所述方...

【技术特征摘要】

1.一种拟无枝酸菌突变株，其特征在于，所述突变株为，敲除拟无枝酸菌的基因组中表达香兰素脱氢酶的基因和4-羟基-3-甲氧基苯甲酰基-β-羟基丙酰基coa脱氢酶的基因。

2.根据权利要求1所述的拟无枝酸菌突变株，其特征在于，所述突变株是产香兰素的拟无枝酸菌为宿主细胞。

3.根据权利要求2所述的拟无枝酸菌突变株，其特征在于，所述表达香兰素脱氢酶的基因的序列如seq id no.1所示；所述4-羟基-3-甲氧基苯甲酰基-β-羟基丙酰基coa脱氢酶的基因的序列如seq id no.2所示。

4.权利要求1～3任一所述拟无枝酸菌突变株的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，含有vdh基因靶序列的crrna如seq idno.3所示。

6.根据权利要求5所述的构...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑璞，王冠娜，吴丹，陈鹏程，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：