【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开公开了将编码α-1,2-岩藻糖基转移酶的特定异源基因识别并引入到lnt生产菌株中，以生产作为主要hmo化合物的lnfp-i。
技术介绍
1、为了克服hmo化学合成相关的缺点，已经开发了几种酶促方法和发酵方法。已经针对几种hmo开发了基于发酵的工艺，例如2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳-n-四糖、乳-n-新四糖、乳-n-岩藻五糖i、3’-唾液酸乳糖和6’-唾液酸乳糖。基于发酵的工艺通常利用遗传工程细菌菌株，例如重组大肠杆菌(e.coll)。
2、hmo的生物合成生产(例如发酵工艺)是一种有价值的、成本效益高且可大规模应用的hmo制造的解决方案。它依赖于构建的遗传工程细菌，以表达合成所需寡糖所需的糖基转移酶，并利用细菌固有的核苷酸糖池作为hmo前体。
3、hmo的生物技术生产的最新发展使得克服细菌表达系统的某些固有局限性成为可能。例如，可以对生产hmo的细菌细胞进行遗传工程改造，以增加细菌中有限的细胞内核苷酸糖池(wo2012112777)，提高参与hmo生产的酶的活性(wo2016040531)，或促...
【技术保护点】
1.一种用于生产一种或多种岩藻糖基化人乳寡糖(HMO)的方法，所述方法包括以下步骤，
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种岩藻糖基化HMO选自2’-FL、LNFP-I、DFL和LNDFH-I。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法主要生产LNFP-1。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法在步骤c)中收获的HMO中产生的LNFP-I:2’-FL的摩尔比在20:1-2:1范围内。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法在步骤c)中收获的HMO中产生的LNFP-I:L...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于生产一种或多种岩藻糖基化人乳寡糖(hmo)的方法，所述方法包括以下步骤，
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种岩藻糖基化hmo选自2’-fl、lnfp-i、dfl和lndfh-i。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法主要生产lnfp-1。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法在步骤c)中收获的hmo中产生的lnfp-i:2’-fl的摩尔比在20:1-2:1范围内。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法在步骤c)中收获的hmo中产生的lnfp-i:lnt的摩尔比在1000:1-10:1范围内。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述收获的hmo中不存在lnt-ii和/或lnt和/或lndfh-i和/或dfl。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述遗传工程细胞在蔗糖中培养，所述蔗糖作为唯一碳源和能源。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述遗传工程细胞包括编码选自nec和/或yberc(genbank登记号wp_092672081.1和genbank登记号eeq08298.1)的mfs转运蛋白或其功能同源物的异源核苷酸序列，其中所述功能同源物的氨基酸序列与seq id no:4或5中任一个具有至少80％同一性。
9.一种遗传工程细胞，其包括编码如seq id no:1所示的α-1,2-岩藻糖基转移酶蛋白或其氨基酸序列与seq id no:1具有至少80％同一性的功能同源物的重组核酸序列。
10.根据权利要求9所述的遗传工程细胞，其中所述细胞还包括编码糖流出转运蛋白的核酸序列，其选自：
11.根据权利要求9或10所述的遗传工程细胞，其中所述细胞还包括编码β-1,3-n-乙酰基-葡糖胺基转移酶蛋白的核酸序列。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的遗传工程细胞，其中所述细胞还包括编码β-1,3-半乳糖基转移酶蛋白的核酸序列。
13.根据权利要求11或12所述的遗传工程细胞，其中所述β-1,3-n-乙酰基-葡糖胺基转移酶和/或β-1,3-半乳糖基转移酶的表达水平通过增加拷贝数和/或通过选择强调控元件来控制表达而提高。
14.根据权利要求9-13中任一项所述的遗传工程细胞，其中所述细胞能够产生选自2’-fl、lnfp-i、以及lndfh-i和dfl的一种或多种岩藻糖基化hmo。
15.根据权利要求9-14中任一项所述的遗传工程细胞，其中由所述细胞产生的主要岩藻糖基化hmo是lnfp-i。
【专利技术属性】
技术研发人员：M·帕帕扎基斯，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：
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