【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物品种鉴别，尤其涉及一种用于鉴别豌豆品种的分子标记组合、引物组合及其应用。
技术介绍
1、豌豆(pisum sativum l.)有7对同源染色体，2n＝14，在我国种植历史悠久，属被子植门，豆科(leguminosae)，蝶形花亚科，豌豆属(pisum)。为自花授粉作物，春播为一年生，秋冬播越年生，攀援或矮生的日照草本植物。豌豆在我国东西南北各个地区均有分布，不喜干热但喜湿润气候，能耐住寒冷和贫瘠环境但不耐热，适合在多样性的土地条件和干旱地域下生长。豌豆富含蛋白质、淀粉及人体所需的多种微量元素，营养均衡，遗传多样性丰富在我国被广泛种植。截至2020年，中国国家作物种质库(nationalcrop genebankofchina，ncgc)保存着7000多份具有丰富遗传多样性的豌豆种质资源，其中我国特有种质约5000份(71％)，国外种质约2000份(29％)。由于不同地区之间品种交流频繁，从而导致了其种类和品种越发繁多，来源较为复杂，存在大量“同名异种”和“一品多名”种质。豌豆品种混乱、真假难辨，许多生产者不能区分出当地种植的品种，豌豆种子生产者能否生产出优质高产的豌豆品质无法得到保障，从而造成严重损失。多年来，品种鉴定是以形态学标记为依据的。这种方法虽然简单经济，但周期长，花费大，受季节限制，而且很多性状的表现受栽培措施及环境因子影响，从而制约了鉴定的准确性。dna分子标记技术则具有高效、准确、不受环境条件影响、实验操作简单等优点，已广泛应用于植物品种真实性鉴定及纯度检测研究。ssr标记是近年来发展起来的建立
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提出了一种用于鉴别豌豆品种的分子标记组合、引物组合及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术构建的指纹图谱能够准确鉴别不同品种的豌豆。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种用于鉴别豌豆品种的分子标记组合，所述分子标记包括：psssr01、psssr02、psssr03、psssr04、psssr05、psssr06、psssr07、psssr08、psssr09、psssr10和psssr11；所述psssr01通过如seq id no.1～2所示引物对扩增得到，所述psssr02通过如seq id no.3～4所示引物对扩增得到，所述psssr03通过如seq idno.5～6所示引物对扩增得到，所述psssr04通过如seq id no.7～8所示引物对扩增得到，所述psssr05通过如seq id no.9～10所示引物对扩增得到，所述psssr06通过如seq id no.11～12所示引物对扩增得到，所述psssr07通过如seq id no.13～14所示引物对扩增得到，所述psssr08通过如seq id no.15～16所示引物对扩增得到，所述psssr09通过如seq idno.17～18所示引物对扩增得到，所述psssr10通过如seq id no.19～20所示引物对扩增得到，所述psssr11通过如seq id no.21～22所示引物对扩增得到。
3、本专利技术还提供了一种用于鉴别豌豆品种的引物组合，包括11对引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如seq id no.1～22所示。
4、本专利技术还提供了一种用于鉴别豌豆品种的试剂盒，包含所述的引物组合。
5、本专利技术还提供了一种豌豆指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：采集不同生长习性的豌豆并编号，利用权利要求2所述的引物组合对所述不同品种的豌豆的dna进行pcr扩增，对所述扩增得到的扩增产物进行电泳检测，根据电泳检测的结果构建所述豌豆指纹图谱。
6、优选的，所述豌豆品种包括资源库号为19wd045的dwd05-01、资源库号为19wd109的成豌11号、资源库号为19wd208的c13、资源库号为19wd001的方绿豌豆、资源库号为19wd034的杂粮甜豌豆、资源库号为19wd083的wd-0030、资源库号为19wd040的定豌7号、资源库号为19wd077的wd-0007、资源库号为19wd081的wd-0013、资源库号为19wd006的麻豌豆、资源库号为19wd010的澳洲红玉豆、资源库号为19wd223的s6071、资源库号为19wd005的黑眼豌豆、资源库号为19wd228的sw1102、资源库号为19wd196的c01、资源库号为19wd224的1702、资源库号为19wd007的彩豌豆、资源库号为19wd234的s5008、资源库号为19wd235的rc09、资源库号为19wd012的食荚型水果甜豌豆、资源库号为19wd020的鲜嫩二号豌豆、资源库号为19wd021的美国甜脆豌豆、资源库号为19wd031的豌豆、资源库号为19wd090的德利荷兰豆、资源库号为19wd073的wd-0019、资源库号为19wd085的优选法国008香豆、资源库号为19wd050的dwd05-03、资源库号为19wd104的猪耳朵扁豆、资源库号为19wd084的wd-0009、资源库号为19wd051的dwd05-010、资源库号为19wd226的wd04-09、资源库号为19wd004的黑豌豆。
7、优选的，所述pcr扩增的反应体系为：50ng/μldna模板1μl，10pmo1/l上游引物0.5μl，10pmo1/l下游引物0.5μl，taq master mix 10μl，ddh2o 8μl。
8、优选的，所述pcr扩增的反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸45s，共35个循环；72℃延伸5min，16℃保存。
9、本专利技术还提供了所述的分子标记组合、所述的引物组合或所述的试剂盒在获取豌豆指纹图谱中的应用。
10、本专利技术还提供了所述的分子标记组合、所述的引物组合、所述的试剂盒或所述的构建方法在鉴别豌豆品种中的应用。
11、与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和技术效果：
12、本专利技术公开了用于鉴别豌豆的分子标记组合，仅利用11对豌豆引物对即能扩增出该分子标记组合，进而能够将豌豆品种有效鉴别，鉴别准确率高达100％。因此，本专利技术公开的分子标记组合和引物组合在进一步鉴别大量豌豆品种方面具有很大潜力，与现有常规形态鉴定相比，具有效果更佳，且节约时间、成本等优点，本专利技术可为豌豆品种dna指纹鉴定提供技术支持。
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1.一种用于鉴别豌豆品种的分子标记组合，其特征在于：所述分子标记包括：PsSSR01、PsSSR02、PsSSR03、PsSSR04、PsSSR05、PsSSR06、PsSSR07、PsSSR08、PsSSR09、PsSSR10和PsSSR11；所述PsSSR01通过如SEQ ID NO.1～2所示引物对扩增得到，所述PsSSR02通过如SEQ ID NO.3～4所示引物对扩增得到，所述PsSSR03通过如SEQ ID NO.5～6所示引物对扩增得到，所述PsSSR04通过如SEQ ID NO.7～8所示引物对扩增得到，所述PsSSR05通过如SEQID NO.9～10所示引物对扩增得到，所述PsSSR06通过如SEQ ID NO.11～12所示引物对扩增得到，所述PsSSR07通过如SEQ ID NO.13～14所示引物对扩增得到，所述PsSSR08通过如SEQID NO.15～16所示引物对扩增得到，所述PsSSR09通过如SEQ ID NO.17～18所示引物对扩增得到，所述PsSSR10通过如SEQ ID NO.19～20所示引物对扩增得到，所述PsSSR11通过如SEQ
2.一种用于鉴别豌豆品种的引物组合，其特征在于：包括11对引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～22所示。
3.一种用于鉴别豌豆品种的试剂盒，其特征在于：包含权利要求2所述的引物组合。
4.一种豌豆指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：采集不同生长习性的豌豆并编号，利用权利要求2所述的引物组合对所述不同品种的豌豆的DNA进行PCR扩增，对所述扩增得到的扩增产物进行电泳检测，根据电泳检测的结果构建所述豌豆指纹图谱。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于：所述豌豆品种包括资源库号为19WD045的DWD05-01、资源库号为19WD109的成豌11号、资源库号为19WD208的C13、资源库号为19WD001的方绿豌豆、资源库号为19WD034的杂粮甜豌豆、资源库号为19WD083的WD-0030、资源库号为19WD040的定豌7号、资源库号为19WD077的WD-0007、资源库号为19WD081的WD-0013、资源库号为19WD006的麻豌豆、资源库号为19WD010的澳洲红玉豆、资源库号为19WD223的S6071、资源库号为19WD005的黑眼豌豆、资源库号为19WD228的SW1102、资源库号为19WD196的C01、资源库号为19WD224的1702、资源库号为19WD007的彩豌豆、资源库号为19WD234的S5008、资源库号为19WD235的RC09、资源库号为19WD012的食荚型水果甜豌豆、资源库号为19WD020的鲜嫩二号豌豆、资源库号为19WD021的美国甜脆豌豆、资源库号为19WD031的豌豆、资源库号为19WD090的德利荷兰豆、资源库号为19WD073的WD-0019、资源库号为19WD085的优选法国008香豆、资源库号为19WD050的DWD05-03、资源库号为19WD104的猪耳朵扁豆、资源库号为19WD084的WD-0009、资源库号为19WD051的DWD05-010、资源库号为19WD226的WD04-09、资源库号为19WD004的黑豌豆。
6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系为：50ng/μLDNA模板1μL，10pmo1/L上游引物0.5μL，10pmo1/L下游引物0.5μL，Taq Master Mix 10μL，ddH2O 8μL。
7.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸45s，共35个循环；72℃延伸5min，16℃保存。
8.如权利要求1所述的分子标记组合、权利要求2所述的引物组合或权利要求3所述的试剂盒在获取豌豆指纹图谱中的应用。
9.如权利要求1所述的分子标记组合、权利要求2所述的引物组合、权利要求3所述的试剂盒或权利要求4～7任一项所述的构建方法在鉴别豌豆品种中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别豌豆品种的分子标记组合，其特征在于：所述分子标记包括：psssr01、psssr02、psssr03、psssr04、psssr05、psssr06、psssr07、psssr08、psssr09、psssr10和psssr11；所述psssr01通过如seq id no.1～2所示引物对扩增得到，所述psssr02通过如seq id no.3～4所示引物对扩增得到，所述psssr03通过如seq id no.5～6所示引物对扩增得到，所述psssr04通过如seq id no.7～8所示引物对扩增得到，所述psssr05通过如seqid no.9～10所示引物对扩增得到，所述psssr06通过如seq id no.11～12所示引物对扩增得到，所述psssr07通过如seq id no.13～14所示引物对扩增得到，所述psssr08通过如seqid no.15～16所示引物对扩增得到，所述psssr09通过如seq id no.17～18所示引物对扩增得到，所述psssr10通过如seq id no.19～20所示引物对扩增得到，所述psssr11通过如seq id no.21～22所示引物对扩增得到。
2.一种用于鉴别豌豆品种的引物组合，其特征在于：包括11对引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如seq id no.1～22所示。
3.一种用于鉴别豌豆品种的试剂盒，其特征在于：包含权利要求2所述的引物组合。
4.一种豌豆指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：采集不同生长习性的豌豆并编号，利用权利要求2所述的引物组合对所述不同品种的豌豆的dna进行pcr扩增，对所述扩增得到的扩增产物进行电泳检测，根据电泳检测的结果构建所述豌豆指纹图谱。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于：所述豌豆品种包括资源库号为19wd045的dwd05-01、资源库号为19wd109的成豌11号、资源库号为19wd208的c13、资源库号为19wd001的方绿豌豆、资源库号为19wd034的杂粮甜豌豆、资源库...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩毅强，陈浩楠，张琪，张文静，杜吉到，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：
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