【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及可用于预防、治疗和/或诊断冠状病毒感染以及包括covid-19在内的与冠状病毒感染相关的疾病和/或并发症的抗体。
技术介绍
1、covid-19的病原体sars-cov-2是一种β冠状病毒，与sars-cov-1和mers冠状病毒有关，它们都会引起严重的呼吸综合征。
2、冠状病毒具有4种结构蛋白：核衣壳蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和刺突(s)蛋白。刺突蛋白是最重要的表面蛋白。它具有细长的三聚体结构并且负责接合靶细胞并触发病毒与宿主膜的融合。来自sars-cov-2和sars-cov-1的刺突蛋白都使用血管紧张素转换酶2(ace2)作为细胞表面受体。ace2在许多组织中表达，包括上呼吸道和下呼吸道的上皮细胞。
3、s蛋白由两个亚基组成，即介导受体结合的s1以及负责病毒和宿主细胞膜融合的s2。它是一种动态结构，能够在受体结合或胰蛋白酶处理后通过s1与s2之间的切割转变为融合后状态(cai等人,2020)。在一些sars-cov-2序列中，在s1与s2亚基之间插入弗林蛋白酶切割位点，并且切割位点的突变在动物模型中会减弱疾病(johnson等人,2020)。s1片段占据s的膜远侧顶端并且可以细分为n末端结构域(ntd)和受体结合结构域(rbd)。虽然两个区域都具有免疫原性，但rbd含有用于ace2结合的相互作用表面(lan等人,2020)。尽管rbd通常靠着s2的顶部往下挤，但它可以向上摆动以接合ace2(roy等人,2020)。单克隆抗体(mab)识别“向上”和“向下”构象中的一种或两种(zhou等人,
4、s蛋白作为治疗性抗体的靶标已得到深入研究。先前对sars-cov-2的研究表明，大多数强效抗体靠近受体结合结构域(rbd)上的ace2相互作用表面结合，以阻断与靶细胞上表达的ace2的相互作用(zost等人,2020；liu等人,2020)或破坏融合前构象(huo等人,2020；yuan等人,2020a；zhou等人,2020)。然而，sars-cov-2治疗性抗体还不能用于临床。
5、变体b.1.1.7现在在英国占主导地位，传播率有所增加。b.1.1.7在刺突中有9个氨基酸变化，包括ace2相互作用表面中的n501y。已在south africa(501y.v2，也称为b.1.351)和brazil(p.1、501y.v2)中检测到不相关的变体，它们在刺突蛋白中分别具有10个和12个氨基酸变化。所有这些都含有rbd的ace2受体结合足迹中的突变，b.1.1.7中的n501y，b.1.351中的k417n、e484k和n501y，以及p.1中的k417t、e484k和n501y，其中n501y突变是所有所共有的。据信ace2受体结合结构域中的这些突变增加了对ace2的亲和力(zahradník等人,2021)。这些突变也落在许多可能提供疫苗诱导保护的强效中和抗体和若干种潜在治疗性单克隆抗体的足迹内(cheng等人,2021；nelson等人,2021)，因此提供了更适合感染新宿主而且可逃避预先存在的抗体反应的突变体病毒。
6、还开发了使用单克隆抗体的sars-cov-2检测试剂盒。实例包括通过例如innova(sars-cov-2抗原快速定性测试)和quidel(sofia 2sars抗原fia)的侧向流动测试。然而，据报道，这些测试非常不准确。
7、本专利技术的目的是鉴定可用于预防、治疗和/或诊断冠状病毒感染以及包括covid-19在内的与冠状病毒感染相关的疾病和/或并发症的另外的改善抗体。
技术实现思路
1、诸位专利技术人最初鉴定了42种识别sars-cov-2的刺突蛋白的人单克隆抗体(mab)(见表1)。这些抗体对sars-cov-2显示出强效的中和活性，有效阻断刺突蛋白与ace2之间的相互作用，和/或阻断与刺突蛋白的高亲和力结合。发现几乎所有高度强效中和mab(ic50<0.1μg/ml)都会阻断与ace2的相互作用，但有一种结合n末端结构域中的独特表位。表1中的一些抗体显示了对hcov-19/wuhan/wiv04/2019毒株以及来自各种谱系的sars-cov-2毒株(诸如b.1.1.7(alpha)、b.1.351(beta)、p.1(gamma)、b.1.617(delta)和b.1.1.529(omicron)谱系的成员)广泛有效的强效中和作用。
2、表1中的许多mab使用公共v基因(大多数群体共有的v基因)并且相对于种系具有很少的突变。还发现表1中的若干种最强效抑制性抗体与先前所述的抗体相比结合独特表位。此外，n-糖基化似乎提高了抗体中和活性。最强效mab在低皮摩尔范围内中和病毒，并且当在covid-19的鼠模型中感染之前或之后施用时显示出有益效果，因此证明了预防和治疗效果。
3、诸位专利技术人通过调换表1抗体的轻链和重链产生了另外的抗体。发现来源于相同公共v基因的抗体提供了特别有用的混合链抗体。例如，所得的混合链抗体中的一些表现出对hcov-19/wuhan/wiv04/2019毒株以及来自各种谱系的sars-cov-2毒株(诸如b.1.1.7、b.1.351和/或p.1谱系的成员)广泛有效的强效中和作用。
4、因此，本专利技术的一个方面提供了一种能够与冠状病毒sars-cov-2的刺突蛋白结合的抗体，其中该抗体：(a)包含表1中的42种抗体中的任一种的至少三个cdr；以及/或者(b)与抗体159、45或384结合相同的表位或与这些抗体竞争。
5、本专利技术还提供了一种抗体组合，该抗体组合包含根据本专利技术的两种或更多种抗体。
6、本专利技术还提供了一种编码根据本专利技术的抗体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体或包含所述载体的宿主细胞。
7、本专利技术还提供了一种用于产生能够与冠状病毒sars-cov-2的刺突蛋白结合的抗体的方法，该方法包括培养本专利技术的宿主细胞以及从所述培养中分离抗体。
8、本专利技术还提供了一种药物组合物，该药物组合物包含：(a)根据本专利技术的抗体或抗体组合，以及(b)至少一种药学上可接受的稀释剂或载剂。
9、本专利技术还提供了根据本专利技术的抗体、抗体组合或药物组合物，用于在通过疗法来治疗人或动物体的方法中使用。
10、本专利技术还提供了根据本专利技术的抗体、抗体组合或药物组合物，用于在治疗或预防与冠状病毒感染相关的疾病或并发症的方法中使用。
11、本专利技术还提供了一种治疗受试者的方法，该方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种能够与冠状病毒SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的抗体，其中该抗体：
2.根据权利要求1所述的抗体，该抗体包含：
3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中表1中的抗体是：
4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，该抗体包含：
5.根据权利要求1或2所述的抗体，该抗体包含重链可变结构域氨基酸序列和轻链可变结构域氨基酸序列，该重链可变结构域氨基酸序列与来自表1中的第一抗体的重链可变结构域具有至少80％序列同一性，并且该轻链可变结构域氨基酸序列与来自表1中的第二抗体的轻链可变结构域具有至少80％序列同一性，其中该第一抗体和第二抗体来源于相同种系重链v区，任选地其中该重链v区是IGHV3-53、IGHV1-58或IGHV3-66；例如其中：
6.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体与表位结合，该表位：
7.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中表1中的抗体是1、88、132、253、263、316、337或382，并且其中表1中的抗体的N-糖基化序列子被保留。
8.根据前述权利
9.根据前述权利要求中的一项所述的抗体，该抗体包含Fc区，该Fc区包含至少一种使得血清半衰期被延长的修饰。
10.一种抗体组合，该抗体组合包含两种或更多种根据权利要求1至9中任一项所述的抗体。
11.根据权利要求10所述的抗体组合，该抗体组合包含两种、三种或四种根据权利要求1至9中任一项所述的抗体。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的抗体组合，该抗体组合包含：
13.一种或多种编码根据权利要求1至9中任一项所述的抗体的多核苷酸、一种或多种包含所述多核苷酸的载体或者一种包含所述载体的宿主细胞。
14.一种用于产生能够与冠状病毒SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的抗体的方法，该方法包括培养根据权利要求13所述的宿主细胞以及从所述培养中分离该抗体。
15.一种药物组合物，该药物组合物包含：(a)根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或根据权利要求10至12中任一项所述的抗体组合，以及(b)至少一种药学上可接受的稀释剂或载剂。
16.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体、根据权利要求10至12中任一项所述的组合或根据权利要求15所述的药物组合物，用于在通过疗法来治疗人或动物体的方法中使用。
17.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体、根据权利要求10至12中任一项所述的组合或根据权利要求15所述的药物组合物，用于在治疗或预防冠状病毒感染或者与冠状病毒感染相关的疾病或并发症的方法中使用。
18.一种治疗受试者的方法，该方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的抗体、根据权利要求10至12中任一项所述的组合或根据权利要求15所述的药物组合物。
19.根据权利要求17或18所述的方法，其中该方法用于治疗SARS-CoV-2感染或者与其相关的疾病或并发症。
20.一种鉴定样品中冠状病毒或者其蛋白质或蛋白质片段的存在的方法，该方法包括：
21.根据权利要求20所述的方法，其中该抗体是抗体45或该组合包含抗体45。
22.一种治疗或预防受试者的冠状病毒感染或者与其相关的疾病或并发症的方法，该方法包括根据权利要求20或权利要求21所述的方法鉴定样品中冠状病毒的存在，以及用抗病毒药物或抗炎剂治疗该受试者。
23.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体、根据权利要求10至12中任一项所述的组合或根据权利要求15所述的药物组合物用于以下方面的用途：(i)预防、治疗和/或诊断冠状病毒感染或者与其相关的疾病或并发症，或者(ii)鉴定样品中冠状病毒或者其蛋白质或蛋白质片段的存在。
24.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体、根据权利要求10至12中任一项所述的组合或根据权利要求15所述的药物组合物用于制造用于治疗或预防冠状病毒感染或者与其相关的疾病或并发症的药物的用途。
25.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体、根据权利要求10至12中任一项所述的组合或根据权利要求15所述的药物组合物，用于在预防、治疗或诊断由SARS-CoV-2毒株引起的冠状病毒感染的方法中使用，相对于hCoV-19/Wuhan/WIV04/2019毒株的刺突蛋白，该SARS-CoV-2毒株在刺突蛋白中的位置417、484和/或501处包含取代，例如它是谱系B.1.1.7、B.1.351、P.1或B.1.1.52...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种能够与冠状病毒sars-cov-2的刺突蛋白结合的抗体，其中该抗体：
2.根据权利要求1所述的抗体，该抗体包含：
3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中表1中的抗体是：
4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，该抗体包含：
5.根据权利要求1或2所述的抗体，该抗体包含重链可变结构域氨基酸序列和轻链可变结构域氨基酸序列，该重链可变结构域氨基酸序列与来自表1中的第一抗体的重链可变结构域具有至少80％序列同一性，并且该轻链可变结构域氨基酸序列与来自表1中的第二抗体的轻链可变结构域具有至少80％序列同一性，其中该第一抗体和第二抗体来源于相同种系重链v区，任选地其中该重链v区是ighv3-53、ighv1-58或ighv3-66；例如其中：
6.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中该抗体与表位结合，该表位：
7.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中表1中的抗体是1、88、132、253、263、316、337或382，并且其中表1中的抗体的n-糖基化序列子被保留。
8.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，该抗体是例如包含igg1恒定区的全长抗体。
9.根据前述权利要求中的一项所述的抗体，该抗体包含fc区，该fc区包含至少一种使得血清半衰期被延长的修饰。
10.一种抗体组合，该抗体组合包含两种或更多种根据权利要求1至9中任一项所述的抗体。
11.根据权利要求10所述的抗体组合，该抗体组合包含两种、三种或四种根据权利要求1至9中任一项所述的抗体。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的抗体组合，该抗体组合包含：
13.一种或多种编码根据权利要求1至9中任一项所述的抗体的多核苷酸、一种或多种包含所述多核苷酸的载体或者一种包含所述载体的宿主细胞。
14.一种用于产生能够与冠状病毒sars-cov-2的刺突蛋白结合的抗体的方法，该方法包括培养根据权利要求13所述的宿主细胞以及从所述培养中分离该抗体。
15.一种药物组合物，该药物组合物包含：(a)根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或根据权利要求10至12中任一项所述的抗体组合，以及(b)至少一种药学上可接受的稀释剂或载剂。
16.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体、根据权利要求10至12中任一项所述的组合或根据权利要求15所述的药物组合物，用于在通过疗法来治疗人或动物体的方法中使用。
17.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体、根据权利要求10至12中任一项所述的组合或根据权利要求15所述的药物组合物，用于在治疗或预防冠状病毒感染或者与冠状病毒感染相关的疾病或并发症的方法中使用。
18.一种治疗受试者的方法，该方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·斯克里顿，J·蒙哥沙巴亚，
申请(专利权)人：瑞乔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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