【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于采后病害生物防治，具体涉及枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法。
技术介绍
1、青椒(capsicum annuum l)在我国种植面积十分广泛，其果肉厚而脆嫩，营养丰富，我国各地均有栽培，在蔬菜生产中占有十分重要的地位，在茄科蔬菜中其产量仅次于番茄。青椒在我国被大量食用，不仅是调味品，而且还富含胡萝卜素、维生素c等营养物质。因其色泽鲜艳、风味独特、营养丰富，在我国乃至全世界都是很受喜爱的一种蔬菜。
2、青椒采后病害主要包括软腐病、炭疽病和灰霉病等，其中软腐病是青椒最重要的细菌性病害，主要由果胶杆菌引起。胡萝卜软腐果胶杆菌(pectobacterium carotovorum)是常见且破坏性极强的软腐病病原菌之一，能感染茄科、十字花科、葫芦科等多科果蔬作物，导致采后果蔬的腐烂变质。青椒在贮运过程中若存在伤口，软腐病病原菌会通过伤口侵染青椒。细菌性软腐病发病迅速，短时间内即可导致青椒腐烂变质，失去食用价值和商品价值，对产业造成严重的经济损失。因此，采取安全、有效的措施防治青椒采后病害，尤其是细菌性病害的发生，对于延长青椒采后货架期、保持商品价值显得尤为重要。
3、目前控制果蔬采后病害的方法主要有物理方法、化学方法和生物防治法。物理方法包括热处理、短波紫外线照射、电离辐射、冷藏、气调贮藏等，具有安全、无毒、无害的优点，但是对设备要求较高，且处理不当易对果蔬的感官品质造成不良影响。化学方法通常是采用化学杀菌剂来控制果蔬采后病害，该方法成本低，见效快且操作简单，但病原菌易产生耐药性，且易残留
4、目前发现的拮抗微生物有酵母菌、细菌和霉菌，其中细菌具有种群庞大、繁殖力高、对病原菌作用方式多样且易于人工培养等优点，其中芽孢杆菌因其对不利环境抵抗力较强、分布广泛，被广泛用于农业生产、食品加工和保鲜、医学、科学研究等领域。常用的芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)、苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)等。如杨瑞先发现解淀粉芽孢杆菌对萝卜软腐病有高效抑制作用；关一鸣等人筛选了一株枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)b11，该菌主要通过重寄生作用、溶菌作用和菌体本身的竞争作用对灰霉病菌，根腐病菌有较强的抑制作用。
5、然而，目前利用拮抗细菌对青椒采后病害进行控制以及贮藏保鲜方面的报道较少，尤其是对其采后软腐病的控制，而且控制效果也有待提高。因此，筛选对青椒采后病害具有良好控制效果的拮抗细菌，延长果实的贮藏期和货架期具有重要的实际应用价值。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷与不足，本专利技术提供一株细菌——枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)，并将其应用于青椒采后病害的防治和青椒的贮藏保鲜，可以有效控制青椒采后病害的发生，减少采后病害造成的损失；经研究证明，喷洒枯草芽孢杆菌能显著减少青椒采后软腐病的发生，降低青椒采后自然腐烂，对青椒品质无显著不良影响，且可以缓减其品质劣变，达到青椒贮藏保鲜的目的，具有潜在的应用价值。
2、为实现以上目的，本专利技术提供方案如下：
3、本专利技术所提供的枯草芽孢杆菌系本实验室分离、纯化，目前保藏在中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏地址：中国武汉，武汉大学；菌株保藏编号为cctcc no:m2023926，保藏日期：2023年06月05日；建议的分类名为：枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)t7。
4、本专利技术提供的枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，按照下述步骤进行：
5、(1)首先将枯草芽孢杆菌接种于lb培养基中进行第一次活化培养，得到培养液；然后吸取培养液，按照体积比为1～2％的接种量再次转接入lb培养基中进行第二次活化培养，得到细菌培养液经离心后得到菌泥，用无菌生理盐水离心洗涤，洗涤后的菌泥用无菌生理盐水重新悬浮得到悬浮液；
6、(2)选取无病害、无机械损伤、色泽均一、大小均匀的青椒，进行表面消毒处理，然后用清水冲洗，清洗后的青椒放入已消毒的塑料筐中晾干；在晾干后的青椒表面打孔，形成一定大小和深度的伤口，每个伤口处加入步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌菌悬液，静置一段时间后再接种与枯草芽孢杆菌菌悬液等体积的胡萝卜软腐果胶杆菌菌悬液，自然晾干后用保鲜膜将其密封，并放置于恒温恒湿培养箱中培养，实现青椒采后软腐病的控制；
7、或者选取无病害、无机械损伤、色泽均一的青椒，不经任何消毒处理，保持青椒的自然状况，在青椒表面均匀喷洒步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌菌悬液，自然晾干后用保鲜膜密封，置于恒温恒湿培养箱中贮藏，即可实现青椒采后病害的防治及贮藏保鲜的用途；
8、所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为cctcc no:m 2023926，建议的分类名为：枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)t7。
9、优选的，步骤(1)中所述的lb培养基(以1l计)为：胰蛋白胨(tryptone)10g，酵母提取物(yeast extract)5g，氯化钠(nacl)10g，蒸馏水定容至1000ml，ph自然，115℃灭菌20min。
10、优选的，步骤(1)中所述离心的条件均为：4℃，8000rpm，时间10～15min。
11、优选的，步骤(1)中所述第一次活化培养和第二次活化培养的条件均为：温度37℃，时间16～18h。
12、优选的，步骤(1)中所述枯草芽孢杆菌浓度为1×109～1×1010cfu/ml。
13、优选的，步骤(2)中所述青椒消毒处理的操作为：将青椒浸入含2％次氯酸钠溶液的水溶液中消毒3～5min；所述塑料筐消毒为清洗干净后晾干，再用75％酒精均匀喷洒消毒。
14、优选的，步骤(2)中所述打孔的孔径为4mm，深度为2mm。
15、优选的，步骤(2)中每个伤口处加入枯草芽孢杆菌菌悬液和胡萝卜软腐果胶杆菌的悬浮液均为15μl；所述静置一段时间为2h；所述胡萝卜软腐果胶杆菌的菌悬液浓度为1×106cfu/ml。
16、优选的，步骤(2)中在恒温恒湿培养箱中培养的温度为10℃培养10d转至20℃培养20d，相对湿度90％。
17、优选的，步骤(2)中所述在青椒表面均匀喷洒枯草芽孢杆菌菌悬液；具体用量为按照1～1.5ml/200-300cm2喷洒菌悬液。
18、与现有技术相比，本专利技术的优点：
19、(1)本专利技术所使用的枯草芽孢杆菌为本实验室分离、纯化，经急性毒性试验验证为无毒类细菌，对人体安全无毒。
20、(2)本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，具体步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的LB培养基，以1L计为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水定容至1000mL，pH自然，115℃灭菌20min。
3.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述离心的条件均为：4℃，8000rpm，时间10～15min。
4.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述第一次活化培养和第二次活化培养的条件均为：温度37℃，时间16～18h。
5.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述枯草芽孢杆菌浓度为1×109～1×1010CFU/mL。
6.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(2)中所述青椒消毒处理的
7.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(2)中所述打孔的孔径为4mm，深度为2mm。
8.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(2)中每个伤口处加入枯草芽孢杆菌菌悬液和胡萝卜软腐果胶杆菌菌悬液均为15μL；所述静置一段时间为2h；所述胡萝卜软腐果胶杆菌菌悬液浓度为1×106CFU/mL。
9.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(2)中在恒温恒湿培养箱中培养的温度为20℃，相对湿度90％。
10.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(2)中所述在青椒表面均匀喷洒枯草芽孢杆菌菌悬液；具体用量为按照1～1.5mL/200-300cm2喷洒菌悬液。
...【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，具体步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的lb培养基，以1l计为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水定容至1000ml，ph自然，115℃灭菌20min。
3.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述离心的条件均为：4℃，8000rpm，时间10～15min。
4.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述第一次活化培养和第二次活化培养的条件均为：温度37℃，时间16～18h。
5.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述枯草芽孢杆菌浓度为1×109～1×1010cfu/ml。
6.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌防治青椒采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：张红印，冯培培，张晓云，岳青蓉，赵利娜，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：
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