【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤诊断与治疗的分子影像、核医学和单域抗体，尤其是涉及一种核素标记trop2特异性单域抗体探针制备方法及应用。
技术介绍
1、1993年比利时科学家hamers等人在《nature》杂志中首次报道在羊驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体(nature.1993；363(6428):446-8.)，这种具有特殊结构域的抗体即为重链抗体(heavy-chain antibodies,hcabs)。通过分子生物学手段，克隆重链抗体的可变区即可得到只有重链可变区的抗原结合片段，即为单域抗体(vhh，variabledomain of heavy chain of heavy chain antibody)。vhh晶体宽为2.5nm，长4nm，分子量只有15kda，因此也被称为单域抗体(ablynx公司注册商品名)。单域抗体是目前已知的可结合目标抗原的最小抗体单位，具有亲和力高、分子量小、制备成本低廉(既可以运用大肠杆菌表达，也可以运用酵母、中国仓鼠卵巢细胞等真核表达体系表达)、易于临床转化和推广应用的优点。
2、单域抗体是近年来构筑分子影像探针的热门靶向载体(theranostics.2014；4(4):386-98.；)j nucl med.2022oct；63(10):1705-1709.)。目前，多种短半衰期核素已用于标记单域抗体，制备单域抗体分子影像探针。锝-99m(99mtc；t1/2＝6.02h)标记靶向程序性死亡配体1(pd-l1)的单域抗体探针已成功转化至临床，用于非小细胞肺癌患者的无创诊断(
3、滋养层细胞表面抗原2(trop2)是一种细胞膜表面糖蛋白，由一个36kda的新生多肽经n-连接糖基化翻译修饰形成。它通过多种信号传导途径调节肿瘤的增殖、侵袭和迁移，并在干细胞生物学中发挥作用。在一项包含197个石蜡包埋的胰腺癌原发肿瘤组织的回顾性研究中，分析了trop2抗原的表达，免疫组化结果发现55％的抗原呈过度表达，这与淋巴结转移、肿瘤分化不良和预后不良明显相关(p<0.05)。trop2的表达也与胃癌、女性生殖系统肿瘤、前列腺癌和结直肠癌等恶性肿瘤的生物学侵袭性和预后不良有关，表明其促进肿瘤的发生发展。trop2在正常组织和肿瘤中的表达差异使其成为极具潜力的肿瘤特异性标志物，并且能避免潜在的副作用。目前已经有以trop2为靶点抗体药物偶联物药物进入临床试验。因此，目前迫切需要开发一种靶向trop2的诊断工具，以实现对实体瘤中trop2表达的无创可视化和监测。在研究伴随诊断工具的基础上，还可以进一步开发出针对trop2的新型治疗方法。
4、申请人前期系列基础与临床研究表明，通过巧妙地融合抗体非凡的靶向特异性和正电子发射断层扫描(pet)的优越灵敏度和分辨率，免疫pet相较于免疫组织化学染色(immunohistochemical，ihc)或其他传统预测标志物可以更好的显示体内感兴趣靶点的分布情况及分布丰度，特别是异质性表达情况，并更好的预测对于靶向治疗或免疫治疗的应答反应(chem rev.2020；120(8):3787-3851.)。例如，靶向人类表皮生长因子受体2的免疫pet显像探针在乳腺癌中的价值已经得到临床验证。基于上述证据和我们之前的发现，我们假设靶向trop2的免疫pet显像探针可以无创地显示肿瘤内trop2表达，并为trop2阳性的实体瘤的诊断和监测提供了更好的方法。此外，已有证据表明，放射免疫治疗(rit)和预靶向放射免疫治疗(prit)可能帮助肿瘤患者长时间缓解病情，甚至根除多种癌症类型。
5、目前，临床实践及文献报道中没有trop2特异性单域抗体分子影像探针或核素标记诊疗一体化探针的报道。存在基于trop2单克隆抗体的分子影像探针(eur j nucl medmol imaging.2022feb；49(3):861-870.)以及核素标记诊疗一体化探针(eur j nucl medmol imaging.2022dec；50(1):168-183.)的报道。但放射性标记单克隆抗体的应用受到高成本、使用长半衰期放射性核素的必要性、一周内繁琐的成像过程以及相关的辐射暴露的严重阻碍。为了改善抗体诊断在临床中的应用，分子影像领域在积极探索预靶向成像策略或使用分子量较小的抗体衍生物来实现当日分子成像(same-day imaging)。在小抗体形式中，来自骆驼科的单结构域抗体是分子量约为15kda的最小抗原结合部分。小尺寸、高亲和力和易于工程设计使单域抗体成为分子成像的绝佳替代品(j nucl med.2022oct；63(10):1705-1709.)。近年来，我们专注于单域抗体衍生示踪剂的开发和临床转化，以发挥其优越的分子成像特性。目前国内外尚无trop2特异性单域抗体分子影像探针。
技术实现思路
1、为了填补该领域的空白，我们在这里描述了由单域抗体衍生的trop2靶向诊疗对的构建，并表征了其在细胞衍生异种移植(cdx)模型中的诊断及治疗价值。因此，本领域的技术人员致力于开发一种制备成本低廉、分子量小、体内循环时间短、显像周期短、辐射剂量低、易于临床转化应用的单域抗体免疫pet显像探针。具体而言，本专利技术提供了一种核素标记trop2特异性单域抗体探针制备方法及应用。
2、trop2特异性单域抗体
3、在一个方面，本专利技术提供了一种trop2特异性单域抗体，其包含：
4、具有seq id no.1所示的氨基酸序列的cdr1、具有seq id no.2所示的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no.3所示的氨基酸序列的cdr3。
5、更具体地，本专利技术的trop2特异性单域抗体具有seq id no.4、6、8或10所示的氨基酸序列。
6、在本专利技术中，为了简便起见，将具有seq id no.4、6、8或10所示的氨基酸序列的trop2特异性单域抗体分别称为t4、t5、rt4或rt5。
7、如本文所用，术语“单域抗体(single-domain antibody,sdab)”也称为“纳米抗体(nanobody)”或vhh(variable domain of heavy chain of heavy chain antibody)，它们可互换使用。纳米抗体具有本领域技术人员通常理解的含义，其是指由单个单体可变抗体结构域(例如单个重链可变区)所组成的抗体片段，通常来源于重链抗体(例如骆驼科动物抗体或鲨鱼抗体)的可变区。典型地，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Trop2特异性单域抗体，其特征在于，包含：
2.根据权利要求1所述的Trop2特异性单域抗体，其特征在于，所述Trop2特异性单域抗体具有SEQ ID No.4、6、8或10所示的氨基酸序列。
3.一种多核苷酸，其特征在于，编码根据权利要求1或2所述的Trop2特异性单域抗体；
4.一种载体，其特征在于，包含根据权利要求3所述的多核苷酸。
5.一种宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求4所述的载体。
6.一种人Trop2特异性18F标记单价单域抗体探针，其特征在于，包含经放射性核素标记的根据权利要求1或2所述的Trop2特异性单域抗体。
7.根据权利要求6所述的人Trop2特异性18F标记单价单域抗体探针，其特征在于，根据权利要求1或2所述的Trop2特异性单域抗体经由双功能螯合剂被放射性核素标记。
8.根据权利要求7所述的人Trop2特异性18F标记单价单域抗体探针，其特征在于，根据权利要求2所述具有SEQ ID No.8所示的氨基酸序列的Trop2特异性单域抗体经由(±)-H3RES
9.一种用于可视化Trop2的表达、诊断Trop2相关的肿瘤、预测Trop2相关肿瘤的进展和预后、预测Trop2相关肿瘤的治疗效果或治疗Trop2相关肿瘤的试剂盒或组合物，其特征在于，包含根据权利要求1或2所述的Trop2特异性单域抗体、根据权利要求3所述的多核苷酸、根据权利要求4所述的载体、根据权利要求5所述的宿主细胞、根据权利要求6-8中任一项所述的探针。
10.根据权利要求1或2所述的Trop2特异性单域抗体、根据权利要求3所述的多核苷酸、根据权利要求4所述的载体、根据权利要求5所述的宿主细胞或根据权利要求6-8中任一项所述的探针在制备用于可视化Trop2的表达、诊断Trop2相关的肿瘤、预测Trop2相关肿瘤的进展和预后、预测Trop2相关肿瘤的治疗效果或治疗Trop2相关肿瘤的试剂盒或组合物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种trop2特异性单域抗体，其特征在于，包含：
2.根据权利要求1所述的trop2特异性单域抗体，其特征在于，所述trop2特异性单域抗体具有seq id no.4、6、8或10所示的氨基酸序列。
3.一种多核苷酸，其特征在于，编码根据权利要求1或2所述的trop2特异性单域抗体；
4.一种载体，其特征在于，包含根据权利要求3所述的多核苷酸。
5.一种宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求4所述的载体。
6.一种人trop2特异性18f标记单价单域抗体探针，其特征在于，包含经放射性核素标记的根据权利要求1或2所述的trop2特异性单域抗体。
7.根据权利要求6所述的人trop2特异性18f标记单价单域抗体探针，其特征在于，根据权利要求1或2所述的trop2特异性单域抗体经由双功能螯合剂被放射性核素标记。
8.根据权利要求7所述的人trop2特异性18f标记单价单域抗体探针，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏伟军，黄未，刘建军，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：
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