【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制剂领域，特别涉及一种靶向出血微环境的血小板衍生囊泡修饰凝血因子viiiros响应裂解脂质体及制备方法和应用。
技术介绍
1、fviii是凝血过程中重要的组成部分，如fviii功能缺失则会导致血友病。将单纯的fviii凝血因子作为药物对血友病患者进行治疗存在以下问题：无靶向出血功能；药物使用剂量大且效果差，要将严重血友病患者的血清凝血因子水平提高到80％，对于一个70公斤的患者来说，要注射2800个单位的因子，而且fviii因子的生物半衰期为12小时，为了确保fviii在血清因子水平的稳定，必须每隔8至12小时输注一次；存在耐药性，治疗并发症会形成抑制性抗fviii抗体，大约30％的血友病a患者会产生此种抗体，该抗体会中和输注的fviii蛋白，导致血友病a的发病率和死亡率增加；具有强烈的促进炎症作用；反复冻融影响其生物活性。所以，单纯的输注fviii凝血因子并不能很好的治疗血友病，需要研发一种新的治疗血友病药物。
技术实现思路
1、本专利技术为了解决上述技术问题，提供一种负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡及制备方法和应用。
2、第一方面，本专利技术提供了一种负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡的制备方法，是采用以下技术方案得以实现的。
3、一种负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡的制备方法，包括以下步骤：
4、s1.血小板囊泡的制备
5、取全血离心后得到的富血小板血浆，100-120g减速离心5-
6、s2.薄膜分散法制备脂质体包裹凝血因子viii
7、i.脂质体原料配制
8、每毫升氯仿中加入8-10mg卵磷脂、1.5-2mg胆固醇、2-3mgdspe-2000、0.8-1mg荧光素和7-7.5mg氢氧化钠，混匀后得到脂质体原料溶液；
9、ⅱ.薄膜制备
10、将步骤i配制的脂质体原料溶液在真空状态下旋转蒸发三至五分钟，直至出现层状分布的脂质体膜；
11、ⅲ.脂质体包裹
12、将含凝血因子viii的溶液与氯仿按照相同的体积混合，将含凝血因子viii的溶液与步骤ⅱ制备的脂质体膜混合；
13、iv.超声破碎
14、将步骤ⅲ得到的混合物进行超声破碎，超声破碎的条件为：功率比：35-40％，开2-3秒，关3-4秒，运行时间8-10分钟；
15、v.透析
16、将超声后的混合物装入含0.9％氯化钠水溶液的透析袋中，透析24-48h，得到凝血因子viii脂质体；
17、s3.负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡的制备
18、将步骤s1和s2提取得到的血小板囊泡和凝血因子viii脂质体溶液混合，100um滤器滤过5-10次，得到负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡。
19、进一步的，步骤s2ⅲ中，含凝血因子viii的溶液中，凝血因子viii的浓度为200iu/10ml。
20、进一步的，步骤s2v中，透析袋的分子量为8000-14000。
21、第二方面，本专利技术提供了一种负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡，是采用以下技术方案得以实现的。
22、一种上述制备方法制备得到的负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡。
23、第三方面，本专利技术提供了一种负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡的用途，是采用以下技术方案得以实现的。
24、一种上述负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡在制备治疗血友病药物中的应用。
25、本申请具有以下有益效果。
26、1.本申请的负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡减低了药物毒性和单一性，减少耐药可能性；
27、2.本申请的负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡可以离开血液循环进入淋巴、骨髓和滑液等靶向出血区域，使负载药物聚集在特定的组织器官；
28、3.本申请的负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡促进血管内皮细胞的迁移和修复，增强止血作用；
29、4.本申请的负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡抑制致炎因子的释放，具备良好的抑制炎症作用，能促进巨噬细胞m2型极化转变；
30、5.本申请的负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡经反复冻融后仍能保持其功能，在储存、运输和使用方面具有优势。
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1.一种负载凝血因子VIII脂质体的血小板衍生囊泡的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种负载凝血因子VIII脂质体的血小板衍生囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S2Ⅲ中，含凝血因子VIII的溶液中，凝血因子VIII的浓度为200IU/10ml。
3.根据权利要求1所述的一种负载凝血因子VIII脂质体的血小板衍生囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S2 V中，透析袋的分子量为8000-14000。
4.一种权利要求1-3任一所述制备方法制备得到的负载凝血因子VIII脂质体的血小板衍生囊泡。
5.一种权利要求4所述负载凝血因子VIII脂质体的血小板衍生囊泡在制备治疗血友病药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种负载凝血因子viii脂质体的血小板衍生囊泡的制备方法，其特征在于：步骤s2ⅲ中，含凝血因子viii的溶液中，凝血因子viii的浓度为200iu/10ml。
3.根据权利要求1所述的一种负载...
【专利技术属性】
技术研发人员：金红婷，王栋，陈佳丽，陈文哲，何度，王萍儿，
申请(专利权)人：浙江省中医院，浙江中医药大学附属第一医院浙江省东方医院，
类型：发明
国别省市：
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