【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及南美白对虾过敏原的耐消化线性表位肽及其应用，属于免疫学。
技术介绍
1、食物过敏作为世界各地普遍存在的一类食品安全问题，其发病率在不断增长，引起了人们的广泛关注。食物过敏发病时间短，发病比率高，发病人群涵盖范围大，可引发哮喘、腹泻、荨麻疹、过敏性皮炎等全身性多系统反应，甚至会产生休克危及生命。食物过敏属于免疫球蛋白e(ige)介导的i型(速发型)超敏反应。当食物过敏原进入机体后，选择性地诱导产生特异性ige抗体，使机体处于致敏状态，当相同的过敏原再次进入机体后，通过与特异性ige抗体结合诱导细胞脱颗粒，继而诱发一系列过敏症状。目前，防止食物过敏最有效的途径是避免接触食物过敏源。但由于生产过程中的交叉反应增加了食品存在过敏原的可能性，因此过敏患者需要倍加小心避免食物过敏的发生。
2、目前已经鉴定出的虾主要和次要过敏原包括原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌球蛋白轻链、肌质钙结合蛋白、血蓝蛋白、磷酸丙糖异构酶。虾蛋白经口摄入后，经过胃肠消化后进入机体发挥致敏活性。其中过敏原表位是引发食物过敏反应的免疫物质基础。然而，食物经过消化后，仍有部分耐消化的线性表位存在，这些线性表位会刺激机体产生过敏反应。因此鉴定出真正引起食物过敏的线性表位至关重要。同时对线性表位的研究对开发无过敏和低过敏食品及过敏性疾病的研究具有重大的意义。
技术实现思路
1、本专利技术提供了南美白对虾过敏原的耐消化表位肽，其能用于制备虾及虾制品过敏的诊断试剂。通过消化组学与生物信息学联用的方式可以较为准确的
2、本专利技术提供了南美白对虾过敏原耐消化线性表位肽，所述表位肽的氨基酸序列包括：
3、(1)asp-ser-gly-val-gly-ile-tyr-ala-pro-asp-ala-glu-ala，缩写为dsgvgiyapdaea，如seq id no:1所示，分子量1264.31da；
4、(2)glu-gly-glu-leu-lys-gly-thr-tyr-tyr-pro-leu-thr-gly-met，缩写为egelkgtyypltgm，如seq id no:2所示，分子量1558.77da；
5、(3)gly-arg-gln-gly-asp-pro-his-gly-lys-phe-asp-leu-pro-pro-gly-val，缩写为grqgdphgkfdlppgv，如seq id no:3所示，分子量1676.85da；
6、(4)ile-phe-ala-trp-pro-his-lys-asp-asn-asn-gly-ile-glu，缩写为ifawphkdnngie，如seq id no:4所示，分子量1540.69da；
7、(5)lys-ser-thr-glu-ser-ser-val-thr-val-pro-asp-val-pro-ser-ile-his-asp，缩写为kstessvtvpdvpsihd，如seq id no:5所示，分子量1797.93da。
8、本专利技术提供了南美白对虾过敏原的耐消化表位肽的筛选方法，步骤如下：
9、(1)基于消化组学和生物信息学筛选耐消化线性表位肽
10、将南美白对虾蛋白按照常规模拟消化方法进行胃肠道消化，通过液相色谱-质谱联用鉴定方法，收集南美白对虾蛋白过敏原消化产物中耐消化肽段；通过五种生物信息学软件dnastar、antheprot、abcpred、immunomedicine group、sopma预测南美白对虾过敏原表位，将≥3种软件预测的表位作为南美白对虾过敏原线性表位；将南美白对虾蛋白消化产物中耐消化肽段与预测的线性表位相对比，筛选含有预测的线性表位的耐消化表位肽，作为具有致敏潜力的南美白对虾过敏原耐消化线性表位肽。
11、(2)具有较强致敏能力的南美白对虾过敏原耐消化线性表位肽的筛选
12、通过氨基酸频率和同源性分析，预测步骤(1)中南美白对虾过敏原线性表位中的关键氨基酸；通过分子对接技术，将具有致敏潜力的南美白对虾过敏原耐消化线性表位肽与mhc-ⅱ分子对接；筛选含有较多关键氨基酸和具有较强结合能力的耐消化线性表位肽作为南美白对虾过敏原耐消化线性表位肽。
13、本专利技术还提供了一种抗原组合物，包括所述表位肽的两种或多种。
14、本专利技术还提供了含所述抗原组合物的虾过敏检测试剂盒。
15、在一种实施方式中，所述试剂盒还包括包被液、封闭液、样品稀释液、洗涤液、检测抗体、底物显色液和终止液。
16、本专利技术还提供了用所述检测试剂盒检测虾过敏原抗体的方法，包括以下步骤：
17、(1)用包被液包被抗原组合物至少8h，并封闭至少2h；
18、(2)向步骤(1)包被后的抗原组合物中加入样品稀释液，并孵育至少2h；
19、(3)加入生物素标记的ige二抗和hrp标记的链霉亲和素，孵育至少1h；
20、(4)加入底物显色液，孵育至少15min；
21、(5)加入终止液，并检测吸光度。
22、在一种实施方式中，步骤(1)所述包被液包括碳酸钠缓冲液。
23、在一种实施方式中，步骤(2)所述样品稀释液包括血清稀释液。
24、在一种实施方式中，步骤(4)所述底物显色液包括tmb底物显色液。
25、在一种实施方式中，通过斑点杂交法(dot-blot)发现本专利技术筛选的五条南美白对虾过敏原耐消化线性表位肽均具有ige结合能力。
26、在一种实施方式中，通过酶联免疫吸附反应(elisa)发现本专利技术筛选的表位肽与南美白对虾全蛋白致敏血清有显著的ige结合能力。
27、本专利技术还提供了提高虾过敏反应检测准确度的方法，利用所述表位肽或抗原组合物进行检测。
28、本专利技术还提供了所述表位肽，或所述抗原组合物在虾及虾制品过敏诊断的试剂或试剂盒中的应用。
29、有益效果：
30、本专利技术利用消化组学和生物信息学联用的方法，筛选了南美白对虾过敏原耐消化线性表位，并首次合成了5条预测具有较强致敏潜力的表位肽，所述的表位肽均具有ige结合能力，可以在制备虾及虾制品的过敏诊断试剂中应用，检测准确性高、特异性好，且具有重大的研究意义。
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1.南美白对虾过敏原耐消化线性表位肽，其特征在于，所述表位肽的氨基酸序列包括DSGVGIYAPDAEA、EGELKGTYYPLTGM、GRQGDPHGKFDLPPGV、IFAWPHKDNNGIE或KSTESSVTVPDVPSIHD。
2.一种抗原组合物，其特征在于，所述抗原组合物包括权利要求1所述表位肽的两种或多种。
3.含权利要求2所述抗原组合物的虾过敏检测试剂盒。
4.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括包被液、封闭液、样品稀释液、洗涤液、检测抗体、底物显色液和终止液。
5.用权利要求3或4所述检测试剂盒检测虾过敏原反应抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述包被液包括碳酸钠缓冲液。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述样品稀释液包括血清稀释液。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述底物显色液包括TMB底物显色液。
9.提高虾及虾制品过敏反应检测准确度的方法，其特征在于，
10.权利要求1所述表位肽，或权利要求2所述抗原组合物在虾及虾制品过敏诊断的试剂或试剂盒中的应用。
...【技术特征摘要】
1.南美白对虾过敏原耐消化线性表位肽，其特征在于，所述表位肽的氨基酸序列包括dsgvgiyapdaea、egelkgtyypltgm、grqgdphgkfdlppgv、ifawphkdnngie或kstessvtvpdvpsihd。
2.一种抗原组合物，其特征在于，所述抗原组合物包括权利要求1所述表位肽的两种或多种。
3.含权利要求2所述抗原组合物的虾过敏检测试剂盒。
4.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括包被液、封闭液、样品稀释液、洗涤液、检测抗体、底物显色液和终止液。
5.用权利要求3或4所述检测试剂盒...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙娜，刘瑶，林松毅，姜鹏飞，刘柯欣，王珊，刘巧珍，郝婉婷，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：
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