【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种脐带华通氏组织来源的可注射凝胶及其制备方法与应用，属于生物材料。
技术介绍
1、难治性伤口如糖尿病足、烧伤和放射性溃疡，一旦病理炎症反应开始，使用常规药物很难在短时间内获得预期的治疗效果。组织损伤区域的大小、深度和炎症反应限制了其自我修复的能力。此外，随着年龄的增长，干细胞和祖细胞的活性及数量均呈下降趋势，会导致其再生能力下降，从而使组织修复更加困难。近年来脱细胞材料在组织工程领域得到越来越广泛的应用，为这种组织修复提供了新的思路。
2、细胞外基质（ecm）作为三维网络存在于所有的组织和器官中，它是许多细胞胞外大分子的集合。在显微镜下，ecm是一个复杂的三维大分子网络，由胶原原纤维主导，还包含蛋白多糖和糖蛋白等结构性生物分子，以及各种生长因子。ecm的三维网络与其内细胞的相互作用构成了一个高度动态的生态微环境，在这里细胞的生长、增殖、迁移、分化、自噬在ecm的“支持”下实现了可塑性。细胞在各种行为过程中也向ecm提供反馈，指导细胞外基质微环境的动态构建。ecm和细胞在这种动态平衡中维持着生物体的正常功能，并使组织具有高度的组织特异性。
3、脱细胞的细胞外基质（decm）是一种细胞外基质，它从组织中去除所有细胞和细胞相关成分，并尽可能多地保留天然组织成分和结构。目前，脱细胞基质已被开发用于多种应用，包括基质粉末、贴片、类器官和水凝胶。
4、脱细胞的细胞外基质水凝胶（decmh）最早由fryetes等人报道。decm片段可以被胃蛋白酶消化，当消化的ph和盐浓度调整回生理条件时，d
5、胶原因其良好的组织相容性和可降解性被广泛用于组织工程研发领域。但由于其机械强度不足，在体内水解过程中不能保持空间构型，且降解过快，因此，有必要提高其稳定性。
技术实现思路
1、针对上述现有技术，本专利技术提供了一种脐带华通氏组织来源的可注射凝胶，及其制备方法与应用。
2、本专利技术是通过以下技术方案实现的：
3、脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，包括以下步骤：
4、（1）脱细胞华通氏胶（uc-decm）的制备：将脐带组织切成小块，用pbs缓冲液和氯化钠溶液冲洗和浸泡，以去除血液；匀浆处理，加入triton-x100处理6～12 h，离心去除上清；加入适量水，加入脱氧核糖核酸酶（dnase）、核糖核酸酶（rnase），37℃摇床酶解5～10 h；酶解液离心去除细胞碎片，用蒸馏水反复冲洗，冻干，得脱细胞华通氏胶；
5、（2）可溶性脱细胞华通氏胶的制备：将脱细胞华通氏胶与适量胃蛋白酶的盐酸溶液混合，在室温下搅拌直到完全溶解，形成预凝胶溶液；调整预凝胶溶液中脱细胞华通氏胶的浓度为0.6%～1.2%；
6、（3）交联：将预凝胶溶液与京尼平溶液混合，加入核黄素，在18～22℃交联20～28h；蒸馏水冲洗，置于饱和甘氨酸溶液中浸泡，换液至溶液不再变色，蒸馏水反复冲洗，冻干；置于铝箔上，紫外线照射1.5～2.5 h；
7、（4）向上述制备的预凝胶溶液中加入edta和氯已定，即得脐带华通氏组织来源的可注射凝胶，4℃冷藏保存。
8、进一步地，所述步骤（1）中，dnase的浓度为100 u/ml，rnase的浓度为100 u/ml。
9、进一步地，所述步骤（2）中，胃蛋白酶的盐酸溶液中胃蛋白酶的浓度为4 mg/ml。
10、进一步地，所述步骤（3）中，京尼平溶液的浓度为0.5%（g/ml）；核黄素的终浓度为0.25%（g/ml）。
11、进一步地，所述步骤（4）中，edta的终浓度为17%（g/ml）；氯已定的终浓度为0.1%（g/ml）。
12、利用上述方法制备得到的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶，在作为或制备组织修复支架材料中的应用，在作为或制备干细胞移植载体中的应用，在作为或制备药物载体中的应用，在构建人工器官中的应用。
13、本专利技术的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶，以脐带组织为来源，具有以下有益效果：
14、（1）脐带作为母体和新生儿组织之间的一种营养联系，富含多种生长因子，生物活性高；比成人组织具有更多的未成熟胶原蛋白，且ecm交联较少，对缺陷组织重塑的优势明显。
15、（2）全世界每年有多达1.5亿儿童出生，组织供应充足。
16、（3）年龄的负面影响可以被消除。
17、（4）实现了废物再利用：脐带作为一种生产过程中的废物，通常被用于分离人脐带间充质干细胞和血管内皮细胞。本专利技术利用其制备用于组织修复的水凝胶，实现了废物再利用。
18、本专利技术采用改良方法制备了基于人脐带组织源的decmh，采用京尼平、核黄素和紫外线进行交联，并在凝胶中加入基质金属蛋白酶抑制剂edta和氯已定（抑制胶原降解，维持胶原结构的完整性，是提高再生材料稳定性的关键），并分析了其物理、化学和力学性能。人脐静脉内皮细胞（huvecs）用来描述uc-decmh的生物相容性。水凝胶在体外实验中显示出高迁移能力，这极大地恢复了真正的动态细胞外基质和细胞之间的微环境，以及显示微血管生成的潜力。本专利技术的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶，富含结构蛋白和自然生长因子，适用于任何形状的伤口，同时由于交联剂和氯已定的加入，延长了可注射凝胶在体内的停留时间，为伤口修复和实现医疗废物组织的再利用提供了本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，DNase的浓度为100 U/ml，RNase的浓度为100 U/ml。
3.根据权利要求1所述的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，胃蛋白酶的盐酸溶液中胃蛋白酶的浓度为4 mg/ml。
4.根据权利要求1所述的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，京尼平溶液的浓度为0.5%，核黄素的终浓度为0.25%。
5.根据权利要求1所述的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中，EDTA的终浓度为17%，氯已定的终浓度为0.1%。
6.利用权利要求1～5中任一项所述的制备方法制备得到的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶。
7.权利要求6所述的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶在制备组织修复支架材料中的应用，或在制备干细胞移植载体中的应用，或在制备药物载体中的应
...【技术特征摘要】
1.脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，dnase的浓度为100 u/ml，rnase的浓度为100 u/ml。
3.根据权利要求1所述的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，胃蛋白酶的盐酸溶液中胃蛋白酶的浓度为4 mg/ml。
4.根据权利要求1所述的脐带华通氏组织来源的可注射凝胶的制备方法，其特征在于：所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：王天林，于艳秋，张志刚，钱云臻，杜畅，章诗瑶，荣耀星，
申请(专利权)人：沈阳细胞治疗工程技术研发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：
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