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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物,具体地,本专利技术涉及一种靶向小鼠clec12b蛋白的纳米抗体及其应用,更具体地,本专利技术涉及一种抗体或抗原结合片段、重组蛋白、核酸分子、表达载体、重组细胞、药物组合物、制药用途以及检测clec12b的试剂盒。
技术介绍
1、clec12b是一种具有276个蛋白质的单型跨膜ⅱ型跨膜蛋白,可分为胞外段,跨膜段和胞内段三个部分。它属于c型凝集素家族的一种新蛋白。据文献报道,clec12b的胞外结构域与激活的自然受体nkg2d具有相当大的同源性。不同之处在于,clec12b在其胞内段结构域具有一段免疫受体络氨酸的抑制基序。这一发现与当前公认的免疫检查点(如tigit和nkg2a)相似,这暗示clec12b可能具有成为免疫检查点的潜力。
2、在骆驼科动物体内存在一种天然缺失轻链的抗体,即重链抗体(又称vhh)。重链抗体的可变区仅由重链组成,直径小于10纳米,因此也被称为纳米抗体。纳米抗体具有分子量小、穿透性强、易于表达、易于改造基因以及易于结合多个靶标的等优点。但目前还没有关于靶向小鼠clec12b蛋白的纳米抗体的报道。
3、因此,本领域亟需开发一种新的抗小鼠clec12b蛋白的羊驼源抗体,以满足研究和应用的需求。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一。
2、在本专利技术的的第一方面,本专利技术提出了一种抗体或抗原结合片段。根据本专利技术的实施例,所述抗体含有选自下列至少之一的重链可变区c
3、根据本专利技术的实施例,所述抗体或抗原结合片段可以与小鼠clec12b蛋白胞外段结合,阻断了肿瘤细胞通过clec12b对nk细胞的抑制信号传递,促进小鼠脾脏nk细胞分泌穿孔素,进而增强nk细胞和其他免疫细胞的杀伤功能。
4、需要说明的是,所述抗体或抗原结合片段适用于多种动物肿瘤模型,包括但不限于小鼠肿瘤模型。
5、gpifsiytw(seq id no:1)。
6、avfgsgastn(seq id no:2)。
7、tavyycqmqtgsgtgwtkedy(seq id no:3)。
8、根据本申请的实施例,上述抗体或抗原结合片段还可以进一步包括下列附加技术特征至少之一:
9、根据本申请的实施例,所述抗体或抗原结合片段包括:
10、分别如seq id no:1、2和3的氨基酸序列所示或与seq id no:1、2和3具有至少80%同一性的氨基酸序列所示的重链可变区cdr1、cdr2、cdr3序列。
11、根据本申请的实施例,所述抗体或抗原结合片段进一步含有重链框架区序列,所述重链框架区序列的至少一部分来自于羊驼源抗体、鲨鱼源抗体、鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体的至少之一。
12、根据本申请的实施例,所述抗体或抗原结合片段进一步含有重链恒定区,所述重链恒定区的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体的至少之一。
13、根据本申请的实施例,所述抗体或抗原结合片段进一步含有轻链可变区,所述轻链可变区包括轻链可变区cdr1、cdr2、cdr3。
14、根据本申请的实施例,所述轻链可变区进一步包括轻链框架区,所述轻链框架区序列的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体、羊驼源抗体或其突变体的至少之一。
15、根据本申请的实施例,所述抗体或抗原结合片段进一步含有轻链恒定区,所述轻链恒定区的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体的至少之一。
16、根据本申请的实施例,所述抗体包括选自多抗、全长单抗、fab抗体、fab’抗体、f(ab’)2抗体、f(ab)2抗体、fv抗体、单链抗体、二聚体、微抗体、纳米抗体以及最小识别单位中的至少之一;或者所述抗原结合片段包括选自f(ab’)2片段、fab’片段、fab片段、f(ab)2片段、fv片段、scfv片段、scfv-fc融合蛋白、scfv-fv融合蛋白和最小识别单位中的至少之一。
17、根据本申请的实施例,所述抗体为纳米抗体。根据本申请的实施例,所述纳米抗体为专利技术人首次制备得到,且在mc38小鼠肿瘤模型中展现出优良的肿瘤抑制效果。
18、在本申请中,所述纳米抗体来自于羊驼源。需要说明的是,也可通过其他来源获得前述纳米抗体,如鲨鱼源等。
19、根据本申请的实施例,所述纳米抗体具有如seq id no:4所示的氨基酸序列,
20、qlqlvesggglvqsggslrlscaasgpifsiytwgwhrqapgkqrelvavfgsgastnyadsvkgrftiskdnakntiylqmnslkpedtavyycqmqtgsgtgwtkedywgqgtqvtvss(seq id no:4)。
21、需要说明的是,seq id no:4所示氨基酸序列中互补决定区(cdr1,cdr2,cdr3)如划线部分所示,其余部分为框架区氨基酸序列。
22、在本申请的第二方面,本申请提出了一种重组蛋白。根据本申请的实施例,所述重组蛋白包括本申请第一方面所述的抗体或抗原结合片段。根据本申请的实施例,所述重组蛋白能够靶向结合小鼠clec12b蛋白胞外段(65-276位氨基酸),阻断了肿瘤细胞通过clec12b对nk细胞的抑制信号传递,促进小鼠脾脏nk细胞分泌穿孔素,进而增强nk细胞和其他免疫细胞的杀伤功能。
23、根据本申请的实施例,上述重组蛋白还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一:
24、根据本申请的实施例,所述重组蛋白进一步包括选自生物活性蛋白或其片段、生物活性多肽或其片段中的至少之一。
25、根据本申请的实施例,所述生物活性蛋白或其片段包括选自蛋白标签、蛋白毒素或其片段、肿瘤坏死因子或其片段、干扰素或其片段、生物反应调节物或其片段和fc片段中的至少之一。
26、需要说明的是,所述“蛋白标签”通常是指与目标蛋白(抗体或抗原结合片段)一起融合表达的一种多肽或者蛋白,其可用于目标蛋白的表达、检测、失踪或纯化等。包括但不限于his标签(又称his-tag,序列为hhhhhh)、flag标签(又称flag-tag,序列为dykddddk)、gst标签(又称gst-tag、谷胱甘肽巯基转移酶标签)、sumo标签和c-myc标签等。
27、需要说明的是,所述“毒素”通常是指对宿主有毒物质,包括蛋白毒素和非蛋白毒素。其中,蛋白毒素包括但不限于相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白a、假单胞菌外毒素和白喉毒素等。在本申请中,蛋白毒素优选为具有酶活性的蛋白毒素。
28、需要说明的是,所述“肿瘤坏死因子”通常是指能使多种肿瘤发生出血性坏死的物质,包括但不限于tnf-α和tnf-β。
29、需要说明的是,所述“干扰素”通常是本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体或抗原结合片段,其特征在于,包括选自下列至少之一的重链可变区CDR序列或与其具有至少80%同一性的氨基酸序列:SEQ ID NO:1~3。
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或抗原结合片段包括:
3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或抗原结合片段进一步含有轻链可变区,所述轻链可变区包括轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3;
4.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体包括选自多抗、全长单抗、Fab抗体、Fab’抗体、F(ab’)2抗体、F(ab)2抗体、Fv抗体、单链抗体、二聚体、微抗体、纳米抗体以及最小识别单位中的至少之一;或者
5.一种重组蛋白,其特征在于,包括:权利要求1~4任一项所述的抗体或抗原结合片段;
6.一种核酸分子,其特征在于,所述核酸分子编码权利要求1~4任一项所述的抗体或抗原结合片段或权利要求5所述的重组蛋白;
7.一种表达载体,其特征在于,携带权利要求6所述的核酸分子;
8.一种重组细
9.一种药物组合物,其特征在于,包括:
10.权利要求1~4任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求5所述的重组蛋白、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体、权利要求8所述的重组细胞或权利要求9所述的药物组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗或者预防肿瘤;
11.权利要求1~4任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求5所述的重组蛋白、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体或权利要求8所述的重组细胞在制备试剂盒中的用途,所述试剂盒用于检测CLEC12B。
12.一种试剂盒,其特征在于,包括:
...【技术特征摘要】
1.一种抗体或抗原结合片段,其特征在于,包括选自下列至少之一的重链可变区cdr序列或与其具有至少80%同一性的氨基酸序列:seq id no:1~3。
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或抗原结合片段包括:
3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或抗原结合片段进一步含有轻链可变区,所述轻链可变区包括轻链可变区cdr1、cdr2、cdr3;
4.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体包括选自多抗、全长单抗、fab抗体、fab’抗体、f(ab’)2抗体、f(ab)2抗体、fv抗体、单链抗体、二聚体、微抗体、纳米抗体以及最小识别单位中的至少之一;或者
5.一种重组蛋白,其特征在于,包括:权利要求1~4任一项所述的抗体或抗原结合片段;
6.一种核酸分子,其...
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