【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物领域，具体而言，涉及一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌及其筛选方法与应用。
技术介绍
1、霉菌是常见的有害菌，常引起食品腐败和一些农业疾病，极不利于农产品储存。因此，抑制有害霉菌的生长成为了食品保藏及农业生产的首要任务。化学防治包括使用唑类、二硝基苯酚和邻苯二甲酰亚胺杀真菌剂。然而，大量使用这些化合物会引起霉菌和害虫的抗药性，并且对环境和人体健康有很大危害。因此，生物防治法是一种经济可行及安全性较高的方式。
2、目前国内外研究发现的海洋生物防治菌株主要包括链霉菌、酵母菌和芽孢杆菌等，相对于陆地来源发现的生物防治菌株种类较少，已报道的进行现代产业化的海洋来源芽孢杆菌其主要应用于青枯病的防治，缺乏抑菌性能较好且成本较低的菌种。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术以黑曲霉为病原菌，从深海中取海泥为样品，利用平板对峙法从中筛选出一株抗黑曲霉效果最明显的菌株。经形态学、生理生化、16s rdna测序鉴定，该菌为贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)。对其生长曲线进行测定，发现该菌株的生存能力较强，很难进入衰亡期。随后利用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、毛霉、青霉、根霉、曲霉、玉米腐烂病原菌、棉花枯萎病原菌、稻瘟病原菌为病原指示菌对其进行了广谱抑菌性研究，根据结果推断贝莱斯芽孢杆菌对革兰氏阴性菌与霉菌有着显著抑制作用。并且研究发现贝莱斯芽孢杆菌产抑菌物质部位在胞外，在工业生产与应用时可直接利用其发酵液进行防治，节约成本。
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3、一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌，bacillus velezensis lg-13，其保藏编号为：cgmcc no.25036。
4、具体的菌株保藏信息如下：
5、保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
6、保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所
7、保藏日期：2022年6月9日
8、保藏编号：cgmcc no.25036
9、进一步地，所述强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌bacillus velezensislg-13的16s rrna基因序列如seq.no.1所示。
10、bacillus velezensis lg-13的生物学特征为：单个菌体呈长杆状，多个菌体排列时首位连接，呈长条状。菌落为：白色不透明，表面干燥有褶皱形成火山口状凸起，菌株边缘不整齐，容易挑取且菌落表面坚硬内部粘稠。
11、本专利技术还提供了所述bacillus velezensis lg-13的筛选方法，包括如下步骤：
12、步骤s1：取黑曲霉菌株斜面，加入4～6ml无菌水，轻微震荡制作孢子悬液，取孢子悬液45～55μl涂布于pda培养基上，静置一段时间；
13、步骤s2：称取1～1.5g海泥于100～150ml的富集培养基中恒温震荡培养，利用试管对菌悬液进行梯度稀释，取100～150μl稀释至10-4～10-6的菌悬液涂布于上述pda培养基中，每个平板涂布适量菌悬液，静置一段时间后，恒温培养，观察是否出现抑菌圈，将出现最大抑菌圈的菌株进行平板划线纯化培养；
14、步骤s3：将黑曲霉生长良好的pda培养基切割成边长为0.8～1.2cm的正方形，将黑曲霉的培养基方块放在pda培养基的中心，并将分离得到的菌种点种到黑曲霉培养基方块的四周，24～26℃下，正置培养4-7天，对比选出抑菌圈最大的菌株为所述的贝莱斯芽孢杆菌菌株；
15、其中，上述孢子悬液涂布于pda培养基上后静置25～35min；所述海泥培养阶段的恒温培养温度为24～26℃，转速为150～170rpm，培养时间为10～14h；菌悬液涂布完成后静置时间为25～35min。
16、本专利技术还提供了所述bacillus velezensis lg-13或其发酵液的应用，可应用于棉花枯萎病、稻瘟病、玉米腐烂病等的防治。
17、本专利技术与现有技术相比的有益效果是：
18、bacillus velezensis lg-13具有很好的耐盐性，且对毛霉、根霉、青霉、稻瘟病原菌、棉花枯萎病原菌、玉米腐烂病原菌和金色葡萄球菌均有很好的抑制作用，并且其抑菌物质产于胞外，有利于工业生产降低成本，同时大大节约了筛选成本，具有极大应用价值和前景。
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1.一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，名称为Bacillusvelezensis LG-13，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.25036。
2.如权利要求1所述的一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述Bacillus velezensis LG-13的16S rRNA基因序列如SEQ.NO.1所示。
3.如权利要求1所述的一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述Bacillus velezensis LG-13的生物学特征为：单个菌体呈长杆状，多个菌体排列时首位连接，呈长条状；菌落为白色不透明，表面干燥有褶皱形成火山口状凸起，菌株边缘不整齐，容易挑取且菌落表面坚硬内部粘稠。
4.一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.如权利要求4所述的一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，步骤S1中孢子悬液涂布于PDA培养基上后静置25～35min。
6.如权利要求4所述的一
7.如权利要求4所述的一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，步骤S2中所述菌悬液涂布完成后静置时间为25～35min。
8.一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌或其发酵液的应用，其特征在于，应用于棉花枯萎病或稻瘟病或玉米腐烂病的防治。
...【技术特征摘要】
1.一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，名称为bacillusvelezensis lg-13，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.25036。
2.如权利要求1所述的一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述bacillus velezensis lg-13的16s rrna基因序列如seq.no.1所示。
3.如权利要求1所述的一种强拮抗作用的海洋来源贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述bacillus velezensis lg-13的生物学特征为：单个菌体呈长杆状，多个菌体排列时首位连接，呈长条状；菌落为白色不透明，表面干燥有褶皱形成火山口状凸起，菌株边缘不整齐，容易挑取且菌落表面坚硬内部粘稠。
4.一种强拮抗...
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