【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及到一种抗人lilrb2全人源scfv抗体及其应用。
技术介绍
1、白细胞免疫球蛋白样受体b2(the leukocyte ig-like receptor subfamily b2，lilrb2)，又名ilt4或mir-10和cd85d，是白细胞免疫球蛋白样受体lilr家族的免疫抑制成员，调节免疫细胞的活化。lilrb2是一种典型的i型跨膜蛋白，具有4个细胞外串联ig样结构域、一个由23个氨基酸组成的跨膜区域和一个具有3个免疫受体酪氨酸抑制基序(information technology investment management，itim)的细胞质尾。在生理学上，通常在许多髓系细胞中表达，包括单核细胞、巨噬细胞、粒细胞和树突状细胞。肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞(tam)高表达lilrb2，lilrb2最主要的配体是hla-g，相关研究表明lilrb2/hla-g结合会激活akt磷酸化和stat6活化，与m2巨噬细胞极化相关。pir-b是lilrb2的小鼠同源物，研究表明pir-b是维持小鼠髓系抑制性细胞(mdsc)m2表型的关键性靶点，在pir-b缺陷小鼠体内tlr和ifn-γ信号在mdsc中放大，il-4/il-13和il-10表达被抑制，小鼠肿瘤负荷减少，treg活化减少。lilrb2主要表达在髓系细胞中，不在b、nk细胞中表达，在其他组织中表达有限，lilrb2是一种有前途针对m2型巨噬细胞的免疫检查点，具有免疫前景和治疗价值。
2、本专利技术提供一种具有不与同源家族结合、具有
3、目前处于临床阶段的lilrb2靶点药物共3个，针对目前研发较快的单克隆抗体药物，如mk-4830、jtx-8064，缺少抗体脱靶的相关检测，主要是细胞水平的脱靶而抗体脱靶会带来细胞毒性等不良反应以及失去抗体治疗功效，因此本专利技术的单克隆抗体与四种不同来源的无关细胞其中一种为正常细胞进行了脱靶检测，均证实无脱靶，抗体的特异性较高。
4、目前靶向lilrb2的疗法主要是单克隆抗体。目前关于该靶点主要是scfv抗体和少量的骆驼单域抗体，尽管lilrb2主要表达在髓系细胞上，但目前该类全人源阻断抗体未针对其他无关细胞的脱靶检测进行比较，本专利在制备全人源阻断抗体的基础上，验证了与其他lilr家族和无关阴性细胞的脱靶检测。
技术实现思路
1、本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。
2、鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本专利技术。
3、因此，本专利技术的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种抗人lilrb2全人源scfv抗体。
4、为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种抗人lilrb2全人源scfv抗体，其包括：scfv抗体的氨基酸序列如seq id no.1～18所示。
5、本专利技术的另一个目的是提供一种抗人lilrb2全人源scfv抗体的制备方法。
6、为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种抗人lilrb2全人源scfv抗体的制备方法，其包括如下步骤：
7、淘选噬菌体文库：准备宿主菌、洗涤干净磁珠并封闭处理后，结合抗原，抗原与磁珠结合后进行封闭，然后进行噬菌体的结合，洗脱后扩增，扩增产物为下一轮淘选文库；
8、单克隆elisa：准备lilrb2蛋白包被板与噬菌体结合，筛选得到阳性噬菌体；
9、全人源lilrb2 scfv抗体的制备：对筛选得到的噬菌体序列pcr扩增抗体基因编码区，通过同源重组与质粒载体拼接，质粒转染到293f细胞中进行抗体制备，得到scfv抗体，进行检测和纯化。
10、作为本专利技术所述抗人lilrb2全人源scfv抗体的制备方法的一种优选方案，其中：制得抗体中，同源重组后制得的表达载体，构建了n端为信号肽、中段为抗体、c端为fc段的融合蛋白。
11、为解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种抗人lilrb2全人源scfv抗体的应用，其包括：scfv抗体靶向结合lilrb2分子。
12、作为本专利技术所述抗人lilrb2全人源scfv抗体的应用的一种优选方案，其中：scfv抗体靶向结合lilrb2分子，使得lilrb2分子与其配体hla-g的结合阻断。
13、作为本专利技术所述抗人lilrb2全人源scfv抗体的应用的一种优选方案，其中：scfv抗体与lilra1、lilra2、lilrb1、lilra3未产生结合反应。
14、作为本专利技术所述抗人lilrb2全人源scfv抗体的应用的一种优选方案，其中：scfv抗体与人源lilrb2或者非人源lilrb2均具有靶向结合能力。
15、作为本专利技术所述抗人lilrb2全人源scfv抗体的应用的一种优选方案，其中：scfv抗体用于制备遏制肿瘤微环境对免疫检查点抑制剂耐药的药物或药物组合物。
16、作为本专利技术所述抗人lilrb2全人源scfv抗体的应用的一种优选方案，其中：抗体用于制备改善肿瘤微环境，逆转tam介导的肿瘤免疫抑制剂
17、本专利技术有益效果：
18、(1)本专利技术能够提供一种靶向人源lilrb2分子且具有阻断配体结合功能的抗体。
19、(2)本专利技术能够提供一种靶向人源lilrb2分子的且不与家族脱靶、不与无关细胞脱靶的抗体。
20、(3)本专利技术能够提供一种靶向人源lilrb2分子的阻断抗体的制备方法。
21、(4)本专利技术能够提供一种靶向人源lilrb2分子的阻断抗体的氨基酸序列及核酸序列。
22、(5)本专利技术提供一种具有不与同源家族结合、具有阻断hla-g配体功能、可结合细胞表面人源lilrb2蛋白并且不与无关细胞脱靶的全人源scfv抗体。
23、(6)本抗体从全人源噬菌体展示抗体库中通过淘选获得，为免疫原性低的全人源scfv抗体。
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1.一种抗人LILRB2全人源ScFv抗体，其特征在于：ScFv抗体的氨基酸序列如SEQ IDNo.1～18所示。
2.一种抗人LILRB2全人源ScFv抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的抗人LILRB2全人源ScFv抗体的制备方法，其特征在于：所述制得抗体中，同源重组后制得的表达载体，构建了N端为信号肽、中段为抗体、C端为Fc段的融合蛋白。
4.一种抗人LILRB2全人源ScFv抗体的应用，其特征在于：所述ScFv抗体靶向结合LILRB2分子。
5.根据权利要求4所述的抗人LILRB2全人源ScFv抗体的应用，其特征在于：所述ScFv抗体靶向结合LILRB2分子，使得LILRB2分子与其配体HLA-G的结合阻断。
6.根据权利要求4或5所述的抗人LILRB2全人源ScFv抗体的应用，其特征在于：所述ScFv抗体与LILRA1、LILRA2、LILRA3、LILRB1未发生结合。
7.根据根据权利要求4或5所述的抗人LILRB2全人源ScFv抗体的应用，其特征在于：所述ScF
8.根据权利要求4所述的抗人LILRB2全人源ScFv抗体的应用，其特征在于：所述ScFv抗体用于制备遏制肿瘤微环境对免疫检查点抑制剂耐药的药物或药物组合物。
9.根据权利要求4或5所述的抗人LILRB2全人源ScFv抗体的应用，其特征在于：所述抗体用于制备改善肿瘤微环境，逆转TAM介导的肿瘤免疫抑制剂。
...【技术特征摘要】
1.一种抗人lilrb2全人源scfv抗体，其特征在于：scfv抗体的氨基酸序列如seq idno.1～18所示。
2.一种抗人lilrb2全人源scfv抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的抗人lilrb2全人源scfv抗体的制备方法，其特征在于：所述制得抗体中，同源重组后制得的表达载体，构建了n端为信号肽、中段为抗体、c端为fc段的融合蛋白。
4.一种抗人lilrb2全人源scfv抗体的应用，其特征在于：所述scfv抗体靶向结合lilrb2分子。
5.根据权利要求4所述的抗人lilrb2全人源scfv抗体的应用，其特征在于：所述scfv抗体靶向结合lilrb2分子，使得lilrb2分子与其配体hla-g的结...
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