一种广谱型新烟碱类杀虫剂单克隆抗体制备及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新烟碱类杀虫剂广谱型单克隆抗体的制备方法及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术中为了获得针对新烟碱类化合物具有高亲和力的特异性抗体，首先选择具有共同活性基团的6种新烟碱类杀虫剂，分别在氯位通过巯基丙酸修饰引入一个氨基活性基团，然后与钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清蛋白(BSA)偶联，制备免疫原与包被原，采用多免疫原共同免疫的方法免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术制备得到广谱型新烟碱单克隆抗体NNIsG10。基于该抗体，以包被原作为检测抗原，建立了异源的间接竞争酶联免疫分析方法(ic‑ELISA)，可用于检测包括吡虫啉、氯噻啉、噻虫胺、噻虫啉、烯式吡虫啉、啶虫脒、环氧虫啶、烯啶虫胺在内的八种新烟碱类杀虫剂，该方法的检测成本低，灵敏度高，操作简便，适用于实际样品中新烟碱类农药的现场快速大量筛查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及本专利技术涉及八种新烟碱类农药的群选性单克隆抗体的制备方法及其在酶联免疫分析方法中的应用，适用于包括吡虫啉、氯噻啉、噻虫胺、噻虫啉、烯式吡虫啉、啶虫脒、环氧虫啶、烯啶虫胺在内的八种新烟碱类农药的现场快速筛查，属于农药残留快速检测领域。

技术介绍

1、新烟碱类杀虫剂作为全球第一大杀虫剂，占杀虫剂市场的近四分之一，新烟碱类农药在全球范围内的大量使用导致其广泛存在于环境和生物链中，对生态系统和人类健康造成了极大的威胁。新烟碱类杀虫剂通过作用于昆虫的烟碱类乙酰胆碱受体而起到杀虫的作用，由于其分子量低，水溶性好，可被植物吸收且具有较长的持效期，增加了环境污染和非靶生物的暴露风险，易造成环境和中药材的污染。

2、不同国家或组织对新烟碱类农药残留进行了严格的限量或使用管理要求。早在2013年欧盟组织基于欧盟食品安全局的风险评估报告，对新烟碱类杀虫剂进行了相关的限制使用规定。作为欧洲农业大国，法国在2018年禁止了新烟碱类杀虫剂的使用。我国新烟碱类杀虫剂限量可能也会做出相应调整，甚至调整为不得检出，以适应形势的发展需求。目前我国针对10种常见的新本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为由保藏编号为45334的杂交瘤细胞株NNIsG10产生的单克隆抗体。

2.用于制备权利要求1所述的新烟碱类杀虫剂单克隆抗体的组合物，其特征在于，所述组合物由下述6种免疫原组成：IMI-KLH、ACE-KLH、THI-KLH、IMZ-KLH、CLO-KLH、TMX-KLH；其中所述IMI-KLH为巯基丙酸修饰的IMI-H与KLH的偶联物；所述ACE-KLH为巯基丙酸修饰的ACE-H与KLH的偶联物；所述THI-KLH为巯基丙酸修饰的THI-H与KLH的偶联物；所述IMZ-KLH为巯基丙酸修饰的IMZ-H与KLH的偶联物；所述CLO...

【技术特征摘要】

1.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为由保藏编号为45334的杂交瘤细胞株nnisg10产生的单克隆抗体。

2.用于制备权利要求1所述的新烟碱类杀虫剂单克隆抗体的组合物，其特征在于，所述组合物由下述6种免疫原组成：imi-klh、ace-klh、thi-klh、imz-klh、clo-klh、tmx-klh；其中所述imi-klh为巯基丙酸修饰的imi-h与klh的偶联物；所述ace-klh为巯基丙酸修饰的ace-h与klh的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨美华，骆骄阳，张竞，郭梦月，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所，
类型：发明
国别省市：