【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽药物领域，具体地说，是一种天然抗菌肽——天蚕素a的订书肽及其制备方法和应用。
技术介绍
1、随着抗微生物药物耐药性的加速增长和全球扩张现象的成倍出现，发现新型抗微生物药物的需求也日益增加。而抗菌肽与传统抗生素相比具有明显的优势，包括减缓耐药性形成，增强广谱抗生素的膜活性，以及有利于调节宿主免疫反应的能力。可是天然抗菌肽鉴于其结构和功能的限制，再加上更严格的监管环境，阻碍了抗菌肽作为潜在治疗药物的进阶之路。那么，对已发现的抗菌肽进行结构修饰以增强其抗菌活性并且降低其耐药性则是快速解决这个全球性难题的优解思路，同时也是天然抗菌肽的研究热点方向之一。
2、订书肽(stapled peptide)是一种微型多肽，通过位点特异性插入非肽序列，形成侧链环合的“订书钉”样全碳结构，从而将多肽稳定在具有生物活性的α-螺旋二级结构中，极大的改善了药理特性。订书修饰抗菌肽，是使其α-螺旋上i，i+4，i，i+7，或者i，i+11位置通过rcm烯烃复分解反应进行构象锁定，用碳碳键作为支架来稳定多肽α-螺旋结构，形成订书肽后原有抗菌肽的α-螺旋更稳定、活性增高、透膜性更好、细胞毒性降低，并且多数耐药菌对订书抗菌肽的耐药性也相应降低，这一修饰策略为固定肽的二级结构和增加多肽药物的成药性提供了良好的化学修饰方法。
3、目前现有技术公开了一些天蚕素结构修饰改造的多肽。例如中国专利文献cn109602894a，公开了一种天蚕素衍生肽在制备抗鲍曼不动杆菌感染药物中的应用，其氨基酸序列为：arg-trp-lys-phe-g
4、本专利技术在现有技术披露的众多信息中注意到，有研究表明经全碳氢订书修饰能够增强抗菌肽的抗菌活性及蛋白稳定性(design of stapled peptide-based protacs formdm2/mdmx atypical degradation and tumor suppression,(n.d.).https://www.thno.org/v12p6665.htm(accessed july 25,2023).m.hirano,c.saito,h.yokoo,c.goto,r.kawano,t.misawa,y.demizu,development of antimicrobial stapledpeptides based on magainin 2sequence,molecules.26(2021)444.https://doi.org/10.3390/molecules26020444.)；还有文献报道应用全碳骨架形成侧链环合结构改造多肽来稳定α-螺旋肽的活性构象，即订书肽，这成为提高活性的直接有效方法(stapledpeptides targeting sars-cov-2spike protein hr1 inhibit the fusion of virus toits cell receptor|journal of medicinal chemistry,(n.d.).https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jmedchem.1c01681(accessed july 25,2023).)。因此，本专利技术推测以订书策略修饰天蚕素a可在一定程度上增强其抗菌活性、蛋白稳定性且降低细胞毒性，从而拓展天蚕素的衍生肽库，降低临床耐药性，也为天蚕素衍生肽的成药提供更多的技术支持。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种天然抗菌肽——天蚕素a的订书肽及其制备方法和应用。
2、本专利技术以氨基树脂为载体，按照模板cec-0：
3、ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2(seq id no.1)氨基酸序列设计并合成27条订书肽。各订书肽示意图如图1-3所示。
4、为了实现上述目的，本专利技术的第一方面，提供一种订书肽，所述的订书肽选自下列中的一种：
5、a)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中18g和22a被s5替换并环合(cec-1-18)；
6、b)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中25a和29v被s5替换并环合(cec-2-1)；
7、c)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中26v和30g被s5替换并环合(cec-2-2)；
8、d)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中27a和31q被s5替换并环合(cec-2-3)；
9、e)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中28v和32a被s5替换并环合(cec-2-4)；
10、f)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中29v和33t被s5替换并环合(cec-2-5)；
11、g)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中30g和34q被s5替换并环合(cec-2-6)；
12、h)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中31q和35i被s5替换并环合(cec-2-7)；
13、i)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中32a和36a被s5替换并环合(cec-2-8)；
14、j)以ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2为肽链模板，其中33t和37k被s5替换并环合(cec-2-9)。
15、本专利技术的第二方面，提供一种如上所述的订书肽在制备抗广谱细菌的药物或试剂中的应用。
16、进一步的，所述的抗广谱细菌的药物或试剂是抑制广谱细菌生长繁殖的药物或试剂。
17、本专利技术的第三方面，提供一种如上所述的订书肽的制备方法，是按照模板cec-0：ac本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种订书肽，其特征在于，所述的订书肽选自下列中的一种：
2.一种如权利要求1所述的订书肽在制备抗广谱细菌的药物或试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的抗广谱细菌的药物或试剂是抑制广谱细菌生长繁殖的药物或试剂。
4.一种如权利要求1所述的订书肽的制备方法，其特征在于，是按照模板CEC-0：Ac-KWKLFKKIEKVGQNIRDGIIKAGPAVAVVGQATQIAK-NH2氨基酸序列在DIC-Oxime缩合体系中，通过Fmoc固相合成法，合成得到肽链，其间在保留关键氨基酸残基的基础上，于特定位置以S5代替原有氨基酸，连接在树脂上直链肽在GrubbsⅠ试剂的二氯乙烷溶液中进行烯烃复分解反应环合后从树脂上切下，纯化后得到目标订书肽。
5.根据权利要求4所述的订书肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(A)中采用的缩合剂为DIC-Oxyme缩合体系，活化剂为DIC，以NMP为溶剂。
7.根据权利要求5所述的订书肽的制备方法，
8.根据权利要求5所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(E)中，使用的乙酰化试剂为吡啶与醋酸酐的混合液，投料比为1:1(v/v)。
9.根据权利要求5所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(F)中所述环合剂为GrubbsⅠ试剂的二氯乙烷的溶液，投料比为树脂载样量：GrubbsⅠ试剂：二氯乙烷＝0.3:58:6(mmol/mg/ml)。
10.根据权利要求5所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(G)中，所述切割试剂为TIPS、H2O、苯酚和TFA的混合溶液，体积比为2:5:5:88；所述切割试剂与直链肽的体积质量比为1:10mL/mg。
...【技术特征摘要】
1.一种订书肽，其特征在于，所述的订书肽选自下列中的一种：
2.一种如权利要求1所述的订书肽在制备抗广谱细菌的药物或试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的抗广谱细菌的药物或试剂是抑制广谱细菌生长繁殖的药物或试剂。
4.一种如权利要求1所述的订书肽的制备方法，其特征在于，是按照模板cec-0：ac-kwklfkkiekvgqnirdgiikagpavavvgqatqiak-nh2氨基酸序列在dic-oxime缩合体系中，通过fmoc固相合成法，合成得到肽链，其间在保留关键氨基酸残基的基础上，于特定位置以s5代替原有氨基酸，连接在树脂上直链肽在grubbsⅰ试剂的二氯乙烷溶液中进行烯烃复分解反应环合后从树脂上切下，纯化后得到目标订书肽。
5.根据权利要求4所述的订书肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的订书肽的制备方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：李翔，陈思，甄博蕊，陆五元，罗赣，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：
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