恶臭假单胞菌谷胱甘肽－非依赖型甲醛脱氢酶的原核表达载体及其构建方法和应用技术

技术编号：3994241 阅读：279 留言：0更新日期：2012-04-11 18:40

本发明专利技术公开了一种高效表达恶臭假单胞菌谷胱甘肽－非依赖型甲醛脱氢酶蛋白的原核表达载体ｐＥＴ２８ａ－ＰＡＤＨ。该载体是含有恶臭假单胞菌谷胱甘肽－非依赖型甲醛脱氢酶基因（ＰＡＤＨ）的原核表达载体。本发明专利技术从恶臭假单胞菌中克隆出ＰＡＤＨ基因，用Ｔ７启动子控制它在大肠杆菌中的表达，表达的重组蛋白质４０％以可溶性形式存在于上清中（占大肠杆菌可溶性总蛋白３０％），６０％存在于包涵体中，通过割胶纯化从上包涵体中很容易获得高纯度的ＰＡＤＨ重组蛋白质，可作为抗原用于ＰＡＤＨ特异性抗体的制备。用亲和层析很容易从大肠杆菌可溶性总蛋白中纯化出有活性的重组ＰＡＤＨ蛋白质，用于ＰＡＤＨ酶制剂的生产及其生化特性分析。