【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程。玉米是世界上重要的栽培农作物之一，利用基因技术，将外源目的基因转入玉米，对玉米品种进行改良具有重要意义。目前，玉米基因转移应用较广的方法是以幼胚愈伤组织为受体系统的基因枪转化法和农杆菌介导法。这两种转移方法的主要不足是一、II型胚性愈伤组织诱导率在基因间具有明显的差异，某些基因的II型胚性愈伤组织诱导率极低，难以建立受体系统；二、在组织培养过程中容易引发受体基因型发生变异；三、转移成本相对较高。本专利技术的目的在于提供一种简便、经济、有效的玉米自交系花粉管通道转基因改良技术，以克服现有技术的不足。本专利技术采用常规技术获得外源目的基因的质粒DNA，检测质粒的浓度、纯度和质粒大小，然后放入-20℃冰箱内保存，本专利技术外源目的基因的导入在玉米自交后6～24小时内进行，将雌穗上的纸袋摘下，用剪刀将雌穗花丝靠近穗顶部全部剪去，留下平齐的切面，然后用针式微量进样器在切口处滴注射器100～300微升纯化好的外源目的基因DNA液，立即重新套上纸袋，做好记载，标明导入的时间和用量；根据目的基因所携带的选择标志抗性基因，配制选择培养基，将收获的种子灭菌后置于选择培养基上发芽生长，选择生长发育正常的幼苗进行多酶链式反应(PCR)检测，对PCR检测呈阳性植株，进行分子杂交(Southern Blot)分析和目标性状鉴定，再对转化后代进行自交纯化和农艺性状鉴定，培养转基因玉米自交系。本专利技术提供了一种简便、经济、有效的玉米自交系转基因改良方法，在玉米授粉后形成花粉管通道的特殊时间，将外源目的DNA通过花粉管通道注入到玉米的刚刚形成的胚体上，使外源目的...
【技术保护点】
玉米自交系花粉管通道转基因改良技术，采用常规技术获得外源目的基因的质粒ＤＮＡ，检测纯度和质粒大小，然后放入－２０℃冰箱内保存，其特征在于外源目的基因的导入在玉米自交后６～２４小时内进行，将雌穗上的纸袋摘下，用剪刀将雌穗花丝靠近穗顶部全部剪去，留下平齐的切面，然后用针式微量进样器在切口处滴注１００～３００微升纯化好的外源目的基因ＤＮＡ液，立即重新套上纸袋，做好记载，标明导入的时间和用量；根据目的基因所携带的选择标志抗性基因，配制选择培养基，将收获的种子灭菌后置于培养基上发芽生长，选择生长发育正常的幼苗进行多聚酶链式反应检测，对多聚酶链式反应检测呈阳性植株，进行分子杂交分析和目标性状鉴定，再对转化后代进行自交纯化和农艺性状鉴定，培养出转基因玉米自交系。
【技术特征摘要】
1.玉米自交系花粉管通道转基因改良技术，采用常规技术获得外源目的基因的质粒DNA，检测纯度和质粒大小，然后放入-20℃冰箱内保存，其特征在于外源目的基因的导入在玉米自交后6～24小时内进行，将雌穗上的纸袋摘下，用剪刀将雌穗花丝靠近穗顶部全部剪去，留下平齐的切面，然后用针式微量进样器在切口处滴注100～300微升纯化好的外源目的基...
【专利技术属性】
技术研发人员：王丕武，张君，张晓玲，祁新，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]
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