一种重组细胞及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种重组细胞及其构建方法和应用。具体地，本发明专利技术重组细胞适合大规模生产GLP‑1融合蛋白，所述GLP‑1融合蛋白具有更高的产量和活性，以及更长的半衰期。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，具体而言，涉及一种重组细胞及其构建方法和应用。

技术介绍

1、胰高血糖素样肽-1(glp-1)也称肠促胰素，是由小肠l细胞分泌，具有多器官靶向调控作用，包括促进胰岛激素分泌，抑制胰高血糖素释放，减缓胃排空，降低食欲，对营养摄取和促进营养吸收具有重要的调控作用。glp-1的生物作用主要通过激活glp-1受体(glp-1r)。glp-1r是一种g蛋白偶联的膜蛋白，主要在胰腺β细胞中表达，在其他组织和细胞(肺、心、肾、胃肠道和脑)中也有一定程度的表达。glp-1与受体结合后激活腺苷酸环化酶(ac)，从而刺激第二信使环磷酸腺苷(camp)生成，并与蛋白激酶a(pka)和camp调节的鸟嘌呤核苷酸交换因子(camp gefs)epac家族相结合[1]。

2、天然glp-1在人体内半衰期仅1-2分钟，主要是由于包括二肽基肽酶iv(dpp-iv)在内的快速酶失活[2]和/或肾清除率[3]所致。因此，科学家们研发了多种长效抗降解glp-1类似物，例如，人源glp-1类似物经过氨基酸替换[4,5]和/或n-末端修饰，包括脂肪酰化[6]n-本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组细胞，其包含编码GLP-1融合蛋白的多核苷酸，其中，所述GLP-1融合蛋白包含GLP-1多肽和免疫球蛋白Fc结构域，其中所述GLP-1多肽选自人GLP-1(7-37)、人GLP-1(7-36)和DPPIV抗性人GLP-1，所述GLP-1多肽与免疫球蛋白Fc结构域共价连接，其中所述GLP-1多肽包含相对于天然人GLP-1的A8G和/或G22E和/或R36G替换，所述免疫球蛋白Fc结构域包含或为IgG2/Fc结构域，所述IgG2/Fc结构域包含C222S替换，和/或所述IgG2/Fc结构域还包含选自A330S替换和P331S替换中的一种或两种。

2.根据权利要求1所述...

【技术特征摘要】

1.一种重组细胞，其包含编码glp-1融合蛋白的多核苷酸，其中，所述glp-1融合蛋白包含glp-1多肽和免疫球蛋白fc结构域，其中所述glp-1多肽选自人glp-1(7-37)、人glp-1(7-36)和dppiv抗性人glp-1，所述glp-1多肽与免疫球蛋白fc结构域共价连接，其中所述glp-1多肽包含相对于天然人glp-1的a8g和/或g22e和/或r36g替换，所述免疫球蛋白fc结构域包含或为igg2/fc结构域，所述igg2/fc结构域包含c222s替换，和/或所述igg2/fc结构域还包含选自a330s替换和p331s替换中的一种或两种。

2.根据权利要求1所述的重组细胞，其还重组或天然表达赖氨酰羟化酶，优选地，其与cos-7细胞相比赖氨酰羟化酶活性水平增加，更优选地，其由中国仓鼠卵巢细胞，特别是chok1细胞得到。

3.根据权利要求1或2所述的重组细胞，

4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组细胞，其中，所述glp-1融合蛋白还包含用于连接所述glp-1多肽和所述免疫球蛋白fc结构域的连接肽，优选地，所述连接肽具有seq idno:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq idno:15、seq id no:16、seq id...

【专利技术属性】
技术研发人员：王庆华，
申请(专利权)人：广州银诺医药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：