一种过表达氨基酸透性酶提高酿酒酵母乙醇产量的方法技术

本发明专利技术为一种过表达氨基酸透性酶提高酿酒酵母乙醇产量的方法，将过表达酿酒酵母基因

【技术实现步骤摘要】
一种过表达氨基酸透性酶提高酿酒酵母乙醇产量的方法


[0001]本专利技术的技术方案涉及用于酵母使用载体引入
DNA
重组技术，具体地说是一种构建高产乙醇的酿酒酵母菌株的方法
。

技术介绍

[0002]燃料乙醇是燃烧清洁的高辛烷值燃料，也是有巨大市场潜力的可再生生物燃料
。
目前，燃料乙醇主要由酿酒酵母等微生物发酵生产
。
但发酵过程中逐渐增加的乙醇浓度会抑制酵母细胞的生长，甚至死亡，导致发酵性能降低，限制了乙醇终产量的提高
。
未来我国燃料乙醇行业的重点是降低生产成本
。
专利
ZL200510014727.6“利用甘油通道蛋白基因缺失降低甘油生成提高乙醇产量”不足以满足日益增长的乙醇工业化需求
。
本专利运用基因重组技术过表达酿酒酵母氨基酸透性酶编码基因以提高乙醇产量，为进一步提升燃料乙醇的工业化产能奠定基础
。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种过表达氨基酸透性酶提高酿酒酵母本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种过表达氨基酸透性酶提高酿酒酵母乙醇产量的方法，其特征在于，将过表达酿酒酵母基因
GAP1
的质粒
YCplac22
‑
GAP1
转化入宿主菌酿酒酵母出发菌株
W303
‑
1A
，在缺色氨酸的
CM
固体培养基上培养2～3天后，筛选带有
YCplac22
‑
GAP1
质粒的转化子，构建得到与对照菌株相比乙醇产量提高5％以上的酿酒酵母工程菌株
HGDAL
‑
300。2.
根据权利要求1所述的构建高产乙醇的酿酒酵母菌株的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤是：第一步，过表达酿酒酵母基因
GAP1
的质粒
YCplac22
‑
GAP1
的构建：
(1.1)
基因
GAP1
片段的合成：根据酿酒酵母
W303
‑
1A
染色体上
GAP1
基因序列，合成
GAP1
基因片段；
(1.2)
过表达酿酒酵母基因
GAP1
的质粒
YCplac22
‑
GAP1
的构建：将质粒
YCplac22
和上述
(1.1)
步得到的基因
GAP1
片段分别用限制性内切酶
BamHⅠ和
PstⅠ消化；消化质粒
YCplac22
的体系为：无菌水
15
μ
L、
酶切缓冲液2μ
L、YCplac22 2
μ
L、BamHⅠ、PstⅠ各1μ
L
；消化
PCR
产物
GAP1
基因片段的体系为：无菌水
2.75
μ
L、
酶切缓冲液
1.5
μ
L、PCR
产物
10
μ
L、BamHⅠ、PstⅠ各
0.375
μ
L
，上述体系分别在
37℃
条件下消化
30min
，之后用
T4DNA
连接酶将质粒
YCplac22
和基因
GAP1
片段连接，连接操作是：在
1.5mL
离心管中，加入无菌水
4.25
μ
L、10
×
T4DNA
连接酶缓冲液1μ
L、
消化
PCR
产物体系4μ
L、
消化质粒
YCplac22
体系
0.5
μ
L
，最后加入
T4DNA
连接酶
0.25
μ
L
，将体系混匀并置于
25℃1
～
2h
，得到连接产物，将该连接产物转入大肠杆菌感受态细胞中进行培养，然后提取质粒，通过双酶切验证，构建得到过表达酿酒酵母基因
GAP1
的质粒
YCplac22
‑
GAP1
；第二步，高产乙醇的酿酒酵母菌株
HGDAL
‑
300
的构建：将上述第一步中构建的过表达酿酒酵母基因
GAP1
的质粒
YCplac22
‑
GAP1
转化入酿酒酵母出发菌株
W303
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张爱利，李袁，刘阳阳，
申请(专利权)人：河北工业大学，
类型：发明
国别省市：