一种生牛乳中细胞外囊泡的分离方法技术

本发明专利技术涉及一种生牛乳中细胞外囊泡的分离方法，属于食品领域

【技术实现步骤摘要】
一种生牛乳中细胞外囊泡的分离方法


[0001]本专利技术涉及一种生牛乳中细胞外囊泡的分离方法，属于食品领域
。

技术介绍

[0002]细胞外囊泡是由各种类型细胞分泌的膜状囊泡，可以在大多数真核细胞生物的血液
、
尿液
、
乳汁等体液中找到
。
根据细胞外囊泡的尺寸大小可分为外泌颗粒
(<50nm)
，外泌体
(30
‑
150nm)
，微泡
/
脱落微泡
(100
‑
1000nm)
，凋亡小体
(1000
‑
5000nm)
，迁移体
(500
‑
3000nm)
，以及大的致癌体
(1000
‑
10000nm)。
牛奶中存在丰富的细胞外囊泡，它们是具囊泡状结构的小球，外部是脂质双层膜的壳结构，表面含有多种特异性蛋白
。
内部是亲水的核内腔，携带来自母体细胞的多种功能本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种生牛乳中细胞外囊泡的分离方法，其特征在于：维持生牛乳温度为
4℃
，将生牛乳进行至少两次离心分离，均收集中间层液
A
；将中间层液
A
的
pH
调节至
4.6
搅拌至沉淀完全，收集上清液
B
，将上清液
B
离心以沉淀酪蛋白，收集上清液
C
，过滤，得到滤液
D
；将滤液
D
进行超速离心，收集离心管底部果冻状沉淀上的一层疏松颗粒；将疏松颗粒在
PBS
中复溶，并继续进行超速离心，收集底部颗粒状沉淀即为细胞外囊泡
。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于：将生牛乳
3000
‑
4000rpm/min、4℃
下离心
30min
，收集中间层液；将中间层液在
5000
‑
7000rpm/min、4℃
下离心
30min
，收集中间层液
A
；将中间层液
A
的
pH
调节至
4.6
，搅拌至沉淀完全，收集上清液
B。3.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于：将调节
pH
后的上清液
B
在
8000
‑
10000rpm/min
，
4℃
下离心
30min
以沉淀酪蛋白，收集上清液
C。4.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于：将上清液
C
依次通过
0.45
μ
m
和
0.22
μ
m
的滤膜进行过滤，得到滤液
D
；滤液
D
在
100000
‑
110000xg
，
4℃
下超速离心
1h
，收集离心管底部果冻状沉淀上的一层疏松颗粒；将疏松颗粒在
PBS
中复溶，在
130000
‑
140000xg
，
4...

【专利技术属性】
技术研发人员：李斌，姜桥，孟喆，王莉，田金龙，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：