特异序列基础的水通道蛋白４高效价抗体的制备及应用制造技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，涉及特异序列基础的水通道蛋白４高效价抗体的制备及应用，利用基因工程技术，将小鼠ＡＱＰ４基因近３′端亲水区克隆到原核表达载体中。经酶切和序列分析后，用重组质粒转化大肠杆菌，并经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷诱导产生ＧＳＴ－ＡＱＰ４融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备抗血清。抗血清的效价及特异性采用ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测。构建融合蛋白原核表达载体，可高效表达特异性的融合蛋白，获得抗ＧＳＴ－ＡＱＰ４融合蛋白的高效价抗血清。该抗ＡＱＰ４多克隆抗体效价与特异性均较良好，适合对ＡＱＰ４的检测应用。为从蛋白水平深入研究ＡＱＰ４功能提供了必要的实验工具。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
特异序列基础的原核表达ＧＳＴ－ＡＱＰ４融合蛋白的多克隆抗体，其特征在于利用特异序列原核表达的ＧＳＴ－ＡＱＰ４融合蛋白作为抗原免疫动物产生抗血清而获得，该抗血清中抗ＧＳＴ－ＡＱＰ４抗体的滴度高达１∶５００００，并经过Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ和免疫组化鉴定抗ＧＳＴ－ＡＱＰ４血清具有较好的特异性，其中，所述的特异序列是指ＡＱＰ４基因近３′端亲水区的一段序列，其氨基酸序列为：　　ｔｋｇｓｙｍｅｖ　ｅｄｎｒｓｑｖｅｔｅ　ｄｌｉｌｋｐｇｖｖｈ　ｖｉｄｉｄｒｇｅｅｋ　ｋｇｋｄ　　核苷酸序列为：　　７８１　ｔｇｔｃｃｔｇａｔｇ　ｔｇｇａｇｃｔｃａａ　ａｃｇｔｃｇｃｃｔｔ　　８４１ａａｇｇａａｇｃｃｔ　ｔｃａｇｃａａａｇｃ　ｃｇｃｇｃａｇｃａｇ　ａｃａａａａｇｇｇａ　ｇｃｔａｃａｔｇｇａ　ｇｇｔｇｇａｇｇａｃ　　９０１ａａｃｃｇｇａｇｃｃ　ａａｇｔｇｇａｇａｃ　ｇｇａａｇａｃｔｔｇ　ａｔｃｃｔｇ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓萌，张淑芝，汪小莞，关新刚，杨南扬，麻彤辉，
申请(专利权)人：东北师范大学，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]