通过修饰的制造技术

本发明专利技术首次提供了表达截短或修饰的

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】cell carcinoma with CAIX CAR
‑
engineered T cells:clinical evaluation and management of on
‑
target toxicity.Mol Ther 21,904
‑
912(2013))。CD19
表达在已经历肿瘤转化的
B
谱系细胞中得以维持，因此，
CD19
可用于诊断
B
细胞白血病，并可作为
CAR T
细胞治疗的靶点
。
现代白血病治疗包括细胞毒性预处理，然后施用抗
CD19CAR T
细胞，其靶向所有
B
细胞，包括白血病和良性群体
。
因此，针对
B
细胞白血病进行治疗的患者中的宿主抗移植物免疫反应很大程度上减弱，并且显示出抗体产生的长期抑制
。
因此，在治疗白血病患者时，
CAR T
细胞被更好地保护以免受免疫排斥
。
在实体器官癌症患者中，针对
CAR T
产品的免疫反应得到增强
(Hege,K.M.
等人
,Safety,tumor trafficking and immunogenicity of chimeric antigen receptor(CAR)
‑
T cells specific for TAG
‑
72in colorectal cancer.J Immunother Cancer 5,22(2017))
并最大限度地降低了这种疗法的功效
。
持久性差会阻碍输注的细胞的效应功能，并阻碍长期治疗的成功
。
[0007]自体诱导多能干细胞
(iPSC)
理论上构成了基于患者特异性细胞的器官修复策略的无限细胞来源
。
然而，它们的产生带来了技术和制造上的挑战，并且是在概念上阻止了任何急性治疗方式的漫长过程
。
从制造的角度来看，基于同种异体
iPSC
的疗法或基于胚胎干细胞的疗法更容易，并且允许产生良好筛选的
、
标准化的
、
高质量的细胞产品
。
然而，由于它们的同种异体来源，此类细胞产品会发生排斥
。
随着细胞抗原性的降低或消除，可以产生普遍可接受的细胞产品
。
因为多能干细胞可以分化成三胚层的任何细胞类型，所以干细胞疗法的潜在应用是广泛的
。
可以通过移植祖细胞来离体或体内进行分化，所述祖细胞在植入部位的器官环境中继续分化和成熟
。
离体分化允许研究人员或临床医生密切监控该过程，并确保在移植前产生合适的细胞群
。
[0008]然而，在大多数情况下，未分化的多能干细胞由于其形成畸胎瘤的倾向而避免用于临床移植疗法
。
相反，此类疗法倾向于使用分化细胞
(
例如，干细胞衍生的心肌细胞移植到心力衰竭患者的心肌中
)。
此类多能细胞或组织的临床应用将受益于在细胞移植后控制所述细胞的生长和存活的“安全特征”。
[0009]本领域寻求能够产生用于再生或替代患病或缺陷细胞的细胞的干细胞
。
可以使用多能干细胞
(PSC)
，因为它们快速繁殖并分化成许多可能的细胞类型
。PSC
家族包括通过不同技术产生并具有不同免疫原性特征的若干成员
。
患者与衍生自
PSC
的工程改造的细胞或组织的相容性决定了免疫排斥的风险和对免疫抑制的需求
。
[0010]从胚泡的内细胞团分离的胚胎干细胞
(ESC)
表现出与接受者不匹配的组织相容性抗原
。
这种免疫屏障不能被人白细胞抗原
(HLA)
分型的
ESC
库所解决，因为即使是
HLA
匹配的
PSC
移植物也会因为作为次要抗原的非
HLA
分子的不匹配而发生排斥
。
同种异体诱导多能干细胞
(iPSC)
也是如此
。
[0011]低免疫原性多能
(hypoimmunogenic pluripotent,HIP)
细胞和细胞产物具有基因敲除或转基因，以保护它们免受包括
T
细胞
、NK
细胞和巨噬细胞在内的免疫系统细胞组分的影响
。
它们也可能是
ABO
血型
O
型和
Rh
阴性
(HIPO
‑
)。
[0012]免疫排斥是细胞治疗成功的主要障碍，目前正在努力开发逃避细胞排斥的通用的同种异体现成细胞
(Yoshihara,E.
等人
,Nature 586,606
‑
611(2020)
；
Wang,B.
等人
,Nat Biomed Eng 5,429
‑
440(2021)
；
Deuse,T.
等人
,Proc Natl Acad Sci U S A 118,(2021))。
然而，此类基因编辑的低免疫原性细胞仍然容易受到针对工程化细胞和病毒产品中的非
HLA
表位
、
细胞类型特异性自身抗原以及异种
(Klee,G.G.Arch Pathol Lab Med 124,921
‑
923(2000))
或合成构建体
(Choe,J.H.
等人
,Sci Transl Med 13(2021))
的抗体杀伤
。
这样的细胞是由转导过程产生的
(Lamers,C.H.
等人
,Blood 117,72
‑
82(2011)
；
Jensen,M.C.
等人
,Biol Blood Marrow Transplant 16,1245
‑
1256(2010))。
细胞毒性抗体可以是预先存在的或治疗诱导的
(Wagner,D.L.
等人
,Nat Rev Clin Oncol 18,379
‑
393(2021))
并危及细胞疗法的持久性和功效
。
[0013]涉及抗体的两种最相关的杀伤机制是通过自然杀伤
(NK)
细胞
、
巨噬细胞
、B
细胞或粒细胞的抗体依赖性细胞毒性
(ADCC)
和通过激活本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种修饰的细胞，其中所述修饰的细胞表达包含截短或修饰的
Fc
受体蛋白，其中所述
Fc
受体蛋白表达导致所述修饰的细胞对抗体依赖性细胞毒性
(ADCC)
或补体依赖性细胞毒性
(CDC)
较不敏感，其中所述截短或修饰减少或消除所述
Fc
受体胞内信号传导
。2.
权利要求1的修饰的细胞，其中所述
Fc
受体蛋白选自截短的
CD16(CD16t)、
截短的
CD32(CD32t)
和截短的
CD64(CD64t)。3.
权利要求1或2中任一项的修饰的细胞，其中所述细胞是多能细胞
。4.
权利要求1‑3中任一项的修饰的细胞，其中所述
Fc
受体蛋白选自与
SEQ ID NO
：
16
具有至少
90
％序列同一性的
CD64t
蛋白
、
与
SEQ ID NO
：
14
具有至少
90
％序列同一性的
CD16t
蛋白和与
SEQ ID NO
：
15
具有至少
90
％序列同一性的
CD32t
蛋白
。5.
权利要求4的修饰的细胞，其中所述
CD64t
蛋白具有
SEQ ID NO
：
16
的序列
。6.
权利要求1‑5中任一项的修饰的细胞，其中所述修饰的细胞衍生自人低免疫原性多能
(HIP)
细胞
。7.
权利要求1‑6中任一项的修饰的细胞，其中所述修饰的细胞衍生自人低免疫原性多能
ABO
血型
O
恒河猴因子阴性
(HIPO
‑
)
细胞
。8.
权利要求1‑7中任一项的修饰的细胞，其中所述修饰的细胞衍生自人诱导多能干细胞
(iPSC)。9.
权利要求1‑7中任一项的修饰的细胞，其中所述修饰的细胞衍生自人胚胎干细胞
(ESC)。10.
权利要求1‑9中任一项的修饰的细胞，其中所述修饰的细胞来自选自人
、
猴
、
牛
、
猪
、
鸡
、
火鸡
、
马
、
绵羊
、
山羊
、
驴
、
骡
、
鸭
、
鹅
、
水牛
、
骆驼
、
牦牛
、
美洲驼
、
羊驼
、
小鼠
、
大鼠
、
狗
、
猫
、
仓鼠和豚鼠的物种
。11.
权利要求1‑
10
中任一项的修饰的细胞，其还包含自杀基因，所述自杀基因被导致所述修饰的细胞死亡的触发剂激活
。12.
权利要求
11
的修饰的细胞，其中所述自杀基因是单纯疱疹病毒胸苷激酶基因
(HSV
‑
tk)
并且所述触发剂是更昔洛韦
。13.
权利要求
12
的修饰的细胞，其中所述
HSV
‑
tk
基因编码与
SEQ ID NO
：4具有至少
90
％序列同一性的蛋白
。14.
权利要求
13
的修饰的细胞，其中所述
HSV
‑
tk
基因编码包含
SEQ ID NO
：4的序列的蛋白
。15.
权利要求
11
的修饰的细胞，其中所述自杀基因是大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因
(EC
‑
CD)
并且所述触发剂是5‑
氟胞嘧啶
(5
‑
FC)。16.
权利要求
15
的修饰的细胞，其中所述
EC
‑
CD
基因编码与
SEQ ID NO
：5具有至少
90
％序列同一性的蛋白
。17.
权利要求
16
的修饰的细胞，其中所述
EC
‑
CD
基因编码包含
SEQ ID NO
：5的序列的蛋白
。18.
权利要求
11
的修饰的细胞，其中所述自杀基因编码诱导型半胱天冬酶蛋白，并且所述触发剂是二聚化化学诱导剂
(CID)。19.
权利要求
18
的修饰的细胞，其中所述自杀基因编码与
SEQ ID NO
：6具有至少
90
％序列同一性的诱导型半胱天冬酶蛋白
。
20.
权利要求
19
的修饰的细胞，其中所述自杀基因编码包含
SEQ ID NO
：6的序列的诱导型半胱天冬酶蛋白
。21.
权利要求
18
‑
20
中任一项的修饰的细胞，其中所述
CID
是
AP1903。22.
权利要求1‑2或4‑
21
中任一项的修饰的细胞，其中所述细胞选自嵌合抗原受体
(CAR)
细胞
、T
细胞
、NK
细胞
、ILC、
内皮细胞
、
多巴胺能神经元
、
神经胶质细胞
、
胰岛细胞
、
胰岛
β
细胞
、
甲状腺细胞
、
内分泌细胞
、
成纤维细胞
、
肝细胞
、
心肌细胞和视网膜色素内皮细胞
。23.
权利要求
22
的修饰的细胞，其中所述
CAR
细胞是
CAR
‑
T
细胞
。24.
权利要求
22
的修饰的细胞，其中所述
CAR
细胞是
CAR
‑
NK
细胞
。25.
一种方法，其包括将权利要求1‑
2、4
‑
24
或
44
‑
49
中任一项的细胞移植至受试者中，其中所述受试者是人
、
猴
、
牛
、
猪
、
鸡
、
火鸡
、
马
、
绵羊
、
山羊
、
驴
、
骡
、
鸭
、
鹅
、
水牛
、
骆驼
、
牦牛
、
美洲驼
、
羊驼
、
小鼠
、
大鼠
、
狗
、
猫
、
仓鼠
、
豚鼠
。26.
权利要求
25
的方法，其中衍生自所述修饰的细胞的所述细胞选自嵌合抗原受体
(CAR)
细胞
、T
细胞
、NK
细胞
、ILC、
内皮细胞
、
多巴胺能神经元
、
神经胶质细胞
、
胰岛细胞
、
心肌细胞
、
肝细胞和视网膜色素内皮细胞
。27.
一种治疗疾病的方法，其包括向受试者施用衍生自权利要求1‑
24
或
44
‑
49
中任一项的修饰的细胞的细胞
。28.
权利要求
27
的方法，其中所述衍生细胞选自嵌合抗原受体
(CAR)
细胞
、T
细胞
、NK
细胞
、ILC、
内皮细胞
、
多巴胺能神经元
、
神经胶质细胞
、
胰岛细胞
、
胰岛
β
细胞
、
甲状腺细胞
、
成纤维细胞
、
肝细胞
、
心肌细胞和视网膜色素内皮细胞
。29.
权利要求
27
...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：