功能化的生物催化组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种组合物，其包含固体载体

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】功能化的生物催化组合物
专利

[0001]本专利技术涉及包含固体载体
、
固定在固体载体表面上的酶或其片段
、
通过包埋酶或其片段来保护酶或其片段的保护层以及固定在保护层表面上的功能成分的组合物
。
本专利技术还涉及所述组合物的生产方法
。
[0002]专利技术背景
[0003]经常需要蛋白质如酶，例如在工业应用
、
诊断或治疗用途中
。
为了稳定蛋白质和
/
或提供针对各种类型的应激的抵抗性，现有技术中已经提出将蛋白质固定在载体的表面上和用保护性材料层保护它们
。
这种方法已经例如在
WO2015/014888
中记载，该文献公开了一种包含固体载体
、
酶和通过包埋酶来保护酶的保护层的生物催化组合物以及该生物催化组合物的生产方法
。
然而，例如
WO2015/014888
中所述的生物催化组合物不能用于治疗应用，因为其缺乏生物相容性和生物可利用性
。
因此，需要提供对于治疗应用相容和有用的生物催化组合物
。
[0004]专利技术概述
[0005]本专利技术提供了包含固体载体
、
固定在固体载体表面上的酶或其片段
、
通过包埋酶或其片段来保护酶或其片段的保护层以及固定在保护层表面上的功能成分的组合物
。
[0006]本专利技术还提供了生产所述包含固体载体
、
固定在固体载体表面上的酶或其片段
、
通过包埋酶或其片段来保护酶或其片段的保护层以及固定在保护层表面上的功能成分的组合物的方法，该方法包括下列步骤：
[0007](a)
提供固体载体；
[0008](b)
将酶或其片段固定在固体载体上；
[0009](c)
在固体载体的表面上形成保护层，以保护固定在固体载体上的酶或其片段；
(d)
将功能成分固定在保护层的表面上
。
[0010]本申请的专利技术人惊奇地发现：本专利技术提供的组合物如果应用于治疗，具有预料不到的低的抗酶抗体响应
(
表明免疫原性低或无免疫原性
)
，显示出低的细胞毒性，不溶血，并且显示出在血液中快速清除，因此使它们极有希望用于治疗用途
。
[0011]附图简要说明
[0012]图
1)
显示了本专利技术的组合物的生产过程的示意图：
a)
酶或片段被固定在固体载体上；
b)
和
c)
保护层围绕固定的酶或其片段生长，将固定的酶或其片段包埋起来；
d)
功能成分被固定在保护层的表面上
。
[0013]图
2)
显示了用
PEG
使纳米颗粒功能化
。
屏蔽纳米颗粒
(NP
‑
1)
与硅烷
‑
PEG
‑
FITC
在
20℃
以
400rpm
搅拌反应
1h。
直方图表示屏蔽纳米颗粒和反应的纳米颗粒的荧光强度
(lex:489nm
；
lem:515nm)。
[0014]图
3)
显示了用人血清白蛋白
(HSA)
使纳米颗粒功能化
。
屏蔽纳米颗粒与
HAS
一起在
20℃
以
400rpm
搅拌孵育
1h。
直方图表示与
HSA
初始溶液相比，反应后纳米颗粒上清液中
HSA
的
Lowry
蛋白质定量
。
[0015]图
4)
显示了用点击化学使纳米颗粒功能化
。
将乙炔基
‑
纳米颗粒与
N3
‑
FITC
一起在
20℃
以
400rpm
搅拌孵育
6h。
直方图表示游离
N3
‑
FITC
和固定在纳米颗粒上的
N3
‑
FITC
的荧光偏振
(lex:489nm
；
lem:515nm)。
[0016]图
5)
显示了
NP
‑1与游离酶相比的持续活性
。
历经
13
周测量了
NP
‑1上的酶活性，并与等量的游离酶进行了比较
。
数据值以第0天对照的百分比表示
。
[0017]图
6)
显示了
NP
‑1在生物体液中的持续活性
。
测定了
NP
‑1在生物体液中的酶活性，并与其在磷酸盐缓冲液中的活性进行了比较
。
活性数据值以磷酸盐缓冲液中对照的百分比表示
。
[0018]图
7)
显示了
NP
‑1上较低的
Ab
‑
酶结合
。
对处于不同发展阶段的纳米颗粒进行了
ELISA
评估
。ELISA
数据以酶浓度
(mg/mL)
表示
。
[0019]图
8)
显示了对蛋白水解酶的抵抗性
。
将
NP
‑
1、
部分屏蔽酶和游离酶暴露于蛋白酶
(10mg/mL)
中
20h。
酶活性数据值以
t0
时对照的百分比表示
。
[0020]图
9)
显示了用
LDH
测定评估
NP
‑1的细胞毒性
。
将
HepG2
暴露于浓度递增的酶灭活纳米颗粒
48h。
使用乳酸脱氢酶
(LDH)
测定检测了细胞损伤
。NP
‑1的细胞毒性数据值以用
triton(1mg/mL)
处理的对照细胞的百分比表示
。
[0021]图
10)
显示了
NP
‑1的溶血评估
。
将全血与递增浓度的
NP
‑1在
37℃
孵育
3h
，每
30min
将样品混合一次
。(A)
照片显示了
800g
离心
15min
后的样品
。(B)
直方图表示了纳米颗粒处理的样品与血液总血红蛋白相本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
组合物，其包含固体载体
、
固定在固体载体表面上的酶或其片段
、
通过包埋酶或其片段来保护酶或其片段的保护层
、
以及固定在保护层表面上的功能成分
。2.
根据权利要求1的组合物，其中当向个体施用组合物时，固定在保护层表面上的功能成分
i)
减少组合物的吞噬；
ii)
增加组合物的循环时间；和
/
或
iii)
靶向肿瘤和
/
或促进组合物内化进入肿瘤细胞中
。3.
根据权利要求1或2的组合物，其中固定在保护层表面上的功能成分选自两亲性药物
、
氨基酸
、
肽
、
蛋白质或其片段
、
硅烷共聚物
、
以及蛋白质或其片段和硅烷共聚物的组合，条件是所述蛋白质或其片段不是固定在固体载体表面上的酶或其片段
。4.
根据权利要求1‑3中任一项的组合物，其中功能成分通过共价结合固定在保护层的表面上
。5.
根据权利要求1的组合物，其中功能成分选自血清白蛋白或其片段；血清白蛋白或其片段和聚乙二醇
/
硅烷共聚物；聚乙二醇
/
硅烷共聚物；免疫球蛋白的
Fc
片段；和免疫球蛋白的
Fc
片段和交联子
。6.
根据权利要求1的组合物，其中功能成分是聚乙二醇
/
硅烷共聚物，优选
mSilane
‑
PEG 2kDa
或
mSilane
‑
PEG 5kDa。7.
根据权利要求1的组合物，其中功能成分是血清白蛋白或其片段
。8.
根据权利要求1的组合物，其中功能成...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：佩尔西奥制药公司，
类型：发明
国别省市：