一种肿瘤相关巨噬细胞疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种肿瘤相关巨噬细胞疫苗

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤相关巨噬细胞疫苗BG@LOX及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医用纳米材料领域，具体是一种肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
及其制备方法与应用
。

技术介绍

[0002]由于肿瘤细胞异常且快速的代谢，绝大多数的实体肿瘤都孕育出了独特的还原性免疫抑制微环境
。
免疫抑制微环境的构成极其复杂，除了肿瘤细胞外还有大量的免疫细胞，它们无法识别异变的肿瘤细胞，并分泌细胞因子来满足肿瘤细胞无止境的增殖，其中，肿瘤相关巨噬细胞分为
M1
型抗肿瘤巨噬细胞与
M2
型促肿瘤巨噬细胞，在恶性实体肿瘤中，大多数巨噬细胞为
M2
型巨噬细胞，它们在血管生成
、
细胞外基质重塑
、
肿瘤细胞增殖与转移中发挥重要作用
。
酶是生物体内的一大类生物催化剂，能有效地催化一系列生化反应，维持机体的正常代谢和生理活动
。
近些年来，越来越多的证据表明，一些酶可以作为诊断和治疗的有效工具
。
最近，几种具有独特催化活性的天然酶或纳米酶被发现能够直接抑制肿瘤生长或通过调节恶性免疫抑制肿瘤微环境来增强其他治疗方法的治疗效果，然而，单一的天然酶与纳米酶难以全面的改善免疫抑制肿瘤微环境，联合天然酶与纳米酶诱导协同催化反应，重塑免疫抑制微环境有望实现高效
M2
巨噬细胞极化与免疫治疗
。
[0003]除了针对巨噬细胞外部肿瘤微环境的改善，其内在的还原性微环境也值得重视
。
根据巨噬细胞体内的谷胱甘肽含量，
M1
与
M2
巨噬细胞也叫做氧化型与还原型巨噬细胞，消耗
M2
巨噬细胞内的谷胱甘肽，打破其原有的氧化还原平衡有利于向
M1
表型转变，因此，在重塑
M2
巨噬细胞外部微环境，提供良好的极化温床的同时，不得不重新考虑其根源性的内部还原性微环境，然而，目前还没有研究去证实与实现内部与外部微环境的同时重塑对
M2
巨噬细胞的影响
。
如何合理构建一种新型的涵盖天然酶与纳米酶的杂化酶的肿瘤相关巨噬细胞疫苗，使其在肿瘤原位引发高效催化反应，重塑
M2
巨噬细胞外部微环境的同时消耗其内部谷胱甘肽，是目前迫切且具有挑战性的任务
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对现有技术的不足，而提供一种肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
及其制备方法与应用
。
这种制备方法操作简单，反应温和，安全性高，制备的肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
毒性低，水溶性好，能够消耗谷胱甘肽转换为同时具有乳酸氧化酶与类过氧化氢酶活性的
PB@LOX
，重塑免疫抑制微环境，通过乳酸消耗和乏氧缓解逆转免疫抑制肿瘤微环境，实现抗肿瘤免疫治疗
。
[0005]实现本专利技术的技术方案是：一种肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
，所述的疫苗
BG@LOX
由谷胱甘肽敏感的
BG
即柏林绿和
LOX
组成，其中
BG
和
LOX
的质量比为：
20
‑
30
：1‑3，
BG
由六氰合铁酸钾
K3Fe(CN)6、
氯化钾
KCl、
六水三氯化铁
FeCl3·
6H2O
与盐酸制成，所述的
LOX
为乳酸氧化酶
。
[0006]制备肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
的方法，包括如下步骤：
1
）将六氰合铁酸钾
K3Fe(CN)6溶于
10ml
超纯水中
、
超声溶解均匀形成溶液
A
；2）将氯化钾
KCl
与六水三氯化铁
FeCl3·
6H2O
溶于盐酸溶液中
、
超声溶解均匀形成溶液
B
；3）在
25℃
常温下将步骤1）中得到的溶液
A
逐滴加入步骤2）中得到的溶液
B
中，搅拌4‑8小时，随后升温至
90℃
，并搅拌
10
‑
36
小时，离心得到绿色沉淀；4）将步骤3）得到的绿色沉淀用蒸馏水和无水乙醇交替清洗至少三次，放入真空干燥箱烘干，得到谷胱甘肽敏感的
BG
；
5)
将步骤4）所得的
BG
溶于超纯水中，得到
BG
溶液，然后逐滴加入
LOX
溶液即乳酸氧化酶溶液，在
25℃
常温下超声搅拌，离心水洗3次，得到纯化后的
BG@LOX。
[0007]步骤1）中所述的六氰合铁酸钾
K3Fe(CN)6的质量为
20
‑
40mg。
[0008]步骤2）中所述的氯化钾
KCl
质量为
10
‑
30mg、
六水三氯化铁
FeCl3·
6H2O
的质量为
20
‑
40mg、
盐酸溶液的浓度为
1 mol/L。
[0009]步骤5）中所述的
BG
溶液的浓度为
200
‑
300 mg/mL、LOX
溶液浓度为
10
‑
50 μ
g/mL、
超声搅拌4‑8小时
。
[0010]上述制备方法制备的肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
在抗肿瘤免疫治疗中的应用，制备的肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
能够消耗谷胱甘肽，打破
M2
巨噬细胞内还原性微环境并转换为
PB@LOX
，转换后的
PB@LOX
具有乳酸氧化酶与类过氧化氢酶活性，能够在肿瘤细胞内协同催化产生氧气并分解乳酸，重塑免疫抑制肿瘤微环境，有利于促肿瘤
M2
巨噬细胞向抗肿瘤
M1
巨噬细胞极化，实现抗肿瘤免疫治疗
。
[0011]这种制备方法操作简单，反应温和，安全性高，制备的肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
毒性低，水溶性好，能够消耗谷胱甘肽转换为同时具有乳酸氧化酶与类过氧化氢酶活性的
PB@LOX
，重塑免疫抑制微环境，通过乳酸消耗和乏氧缓解逆转免疫抑制肿瘤微环境，实现抗肿瘤免疫治疗
。
附图说明
[0012]图1为实施例中所制备的
BG@LOX
的透射电镜本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
，其特征在于，所述的疫苗
BG@LOX
由谷胱甘肽敏感的
BG
即柏林绿和
LOX
组成，其中
BG
和
LOX
的质量比为：
20
‑
30
：1‑3， BG
由六氰合铁酸钾
K3Fe(CN)6、
氯化钾
KCl、
六水三氯化铁
FeCl3·
6H2O
与盐酸制成，所述的
LOX
为乳酸氧化酶
。2.
制备如权利要求1所述的肿瘤相关巨噬细胞疫苗
BG@LOX
的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）将六氰合铁酸钾
K3Fe(CN)6溶于
10ml
超纯水中
、
超声溶解均匀形成溶液
A
；2）将氯化钾
KCl
与六水三氯化铁
FeCl3·
6H2O
溶于盐酸溶液中
、
超声溶解均匀形成溶液
B
；3）在
25℃
常温下将步骤1）中得到的溶液
A
逐滴加入步骤2）中得到的溶液
B
中，搅拌4‑8小时，随后升温至
90℃
，并搅拌
10
‑
36
小时，离心得到绿色沉淀；4）将步骤3）得到的绿色沉淀用蒸馏水和无水乙醇交替清洗至少三次，放入真空干燥箱烘干，得到谷胱甘肽敏感的

【专利技术属性】
技术研发人员：沈星灿，唐顺鑫，韦方棉，蒋邦平，
申请(专利权)人：广西师范大学，
类型：发明
国别省市：