无菌蜜蜂的培育及细菌检测方法技术

本发明专利技术提出一种无菌蜜蜂的培育方法，该方法包括：选择健康蜂群，用囚王笼限制蜂王产卵1周后，将蜂王放入带有一张新建工蜂巢脾的蜂王产卵控制器中产卵；将经过紫外消毒的圆形滤纸折叠成

【技术实现步骤摘要】
无菌蜜蜂的培育及细菌检测方法


[0001]本专利技术属于实验动物资源开发
，特别涉及一种无菌蜜蜂的培育方法
。

技术介绍

[0002]所谓无菌动物是指不能检出任何活的微生物和寄生虫的动物
。
从微生物学的观点看，通常实验动物的体内和体外都会带有寄生虫，体内常带有细菌和病毒，而且难于排除某些潜在的传染病
。
此外，普通实验动物的血清中含有抗体
。
所以使用普通动物进行的科学研究容易受各种因素的干扰，而无菌动物则能避免这一问题，从而保证实验结果的准确性
、
规律性和重复性
。
[0003]蜜蜂是世界上最重要的经济昆虫，由于通量大
、
成本低以及肠道微生物简单等特点，已被广泛应用于脑
‑
肠轴
、
糖尿病及神经退行性等人类疾病研究
。
但目前所用的蜜蜂只是普通的实验用动物，在病原微生物方面没有实行严格的控制
。
因此，建立无菌蜜蜂的制备方法和标准流程将为行为学
、
老年病学及肠道微生物等人类疾病蜜蜂模型的构建提供良好素材，也为蜜蜂实验动物标准化的实现奠定夯实基础
。

技术实现思路

[0004]基于此，本专利技术的目的是提出一种无菌蜜蜂的培育方法，以通过此方法培育的蜜蜂肠道内容物中的细菌总数小于
105。
[0005]一方面，本专利技术提出一种无菌蜜蜂的培育方法，包括以下步骤：
[0006](1)
优质蜂卵的准备：选择
10
框以上的健康蜂群，用囚王笼限制蜂王产卵1周后，将蜂王放入带有一张新建工蜂巢脾的蜂王产卵控制器中产卵，产卵
24
小时后将工蜂巢脾调至蜂群中间位置；
[0007](2)
培养室的构建：将经过紫外消毒的圆形滤纸折叠成
M
形放入无菌培养皿中；在所述培养皿侧身钻一孔并插入一根离心管，所述离心管内装有无菌蔗糖水，并在所述离心管底部打一小孔；
[0008](3)
无菌蜂蛹的获取：待步骤
(1)
中将工蜂巢脾调至蜂群中间位置
(
即蜂王产卵
)
后
19
天，用经过消毒的尖镊子将巢房的封盖以两个半圆方式拨开，并将四周清理干净；之后用经过消毒的软镊子从蜂蛹上方深入巢房壁，向蜂蛹两侧并拢
、
轻捏蜂蛹胸部将蛹取出；
[0009](4)
无菌蜜蜂的培养：将步骤
(3)
中获取的蜂蛹放在步骤
(2)
的培养皿里的滤纸
M
形凹槽上，避免蜂蛹在搬运过程中相互挤压受伤，盖好培养皿盖子并做好标签；将装有蜂蛹的培养皿放入昆虫培养箱中培育至成年蜜蜂，以得到无菌蜜蜂
。
[0010]作为优选，在步骤
(1)
中：用囚王笼限制蜂王产卵时间为1‑3周
。
[0011]作为优选，在步骤
(1)
中：蜂王在蜂王产卵控制器中的产卵时间为
20
‑
24h。
[0012]作为优选，在步骤
(2)
中：所述无菌蔗糖水的浓度为
48
％
‑
52
％
。
[0013]作为优选，在步骤
(2)
中：所述离心管的容量为
1.5ml
‑
2.0ml。
[0014]作为优选，在步骤
(3)
中：蜂王产卵后
18
‑
19
天
。
[0015]作为优选，在步骤
(4)
中：所述昆虫培养箱的内部温度为
34.5℃
‑
35.5℃。
[0016]作为优选，在步骤
(4)
中：所述昆虫培养箱的内部湿度为
74
％
‑
76
％
。
[0017]作为优选，所述无菌蜜蜂的肠道内容物中的细菌总数小于
105。
[0018]另一方面，本专利技术还提出一种无菌蜜蜂的细菌检测方法，用于检测由上述的无菌蜜蜂的培育方法得到的无菌蜜蜂中的细菌数量，包括以下步骤：
[0019]将成年无菌蜜蜂解剖，取其肠道置于
100
μ
l
浓度为
25
％的甘油中，研磨至内容物析出，取1μ
l
稀释至
103倍涂布并进行计数
。
[0020]作为优选，配置
25
％的甘油的步骤为：将甘油和
PBS
缓冲液按
1:3
的体积比例混匀后即为
25
％的甘油
。
[0021]本申请的有益效果为：采用本申请公开的培育方法得到的无菌蜜蜂成活率高，效果好，没有活的微生物和寄生虫感染，实验结果正确可靠，培育成本低廉，便于推广，可广泛应用于肠道微生物
、
老年病学及行为学等方面的研究与生产
。
[0022]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实施例了解到
。
具体实施方式
[0023]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同
。
本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术
。
本文所使用的术语“及
/
或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合
。
[0024]定义：在本文中，除非另有说明，用语“ml”是指“毫升”；
[0025]在本文中，除非另有说明，用语“℃”是指“摄氏度”；
[0026]在本文中，除非另有说明，用语“d”是指“天”；
[0027]在本文中，除非另有说明，用语“h”是指“小时”。
[0028]一方面，本专利技术提出一种无菌蜜蜂的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0029](1)
优质蜂卵的准备：选择群势强大的健康蜂群，用囚王笼限制蜂王产卵1周后，将蜂王放入带有一张新建工蜂巢脾的蜂王产卵控制器中产卵
24
小时后，取出工蜂巢脾并调至蜂群中间位置；
[0030]在本步骤中，蜂王在蜂王产卵控制器中的产卵时间为
24h
，若产卵时间过长则后续的日龄难以确定，若产卵时间过短会后续得到的蜂蛹数量不足
。
[0031](2)
培养室的构建：将经过紫外消毒的圆形滤纸折叠成
M
形放入无菌培养皿中；在所述培养皿侧身钻一孔并插入一根离心管，所述离心管内装有无菌蔗糖水，并在所述离心管底部打一小孔
。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种无菌蜜蜂的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
优质蜂卵的准备：选择
10
框以上的健康蜂群，用囚王笼限制蜂王产卵1周后，将蜂王放入带有一张新建工蜂巢脾的蜂王产卵控制器中产卵
24
小时后，取出工蜂巢脾并调至蜂群中间位置；
(2)
培养室的构建：将经过紫外消毒的圆形滤纸折叠成
M
形放入无菌塑料培养皿中；在所述培养皿侧身钻一孔并插入一根离心管，所述离心管内装有无菌蔗糖水，并在所述离心管底部打一小孔；
(3)
无菌蜂蛹的获取：待步骤
(1)
中将工蜂巢脾调至蜂群中间位置后
19
天，用经过消毒的尖镊子将巢房的封盖以两个半圆方式拨开，并将四周清理干净；之后用经过消毒的软镊子从蜂蛹上方深入巢房壁，向蜂蛹两侧并拢
、
轻捏蜂蛹胸部将蛹取出；
(4)
无菌蜜蜂的培养：将步骤
(3)
中获取的蜂蛹放在步骤
(2)
的培养皿里的滤纸
M
形凹槽上，盖好培养皿盖子并做好标签；将装有蜂蛹的培养皿放入昆虫培养箱中培育至成年蜜蜂，以得到无菌蜜蜂
,
期间要避免蜂蛹在搬运过程中相互挤压受伤，因此，放入滤纸上的蜂蛹数量不能过多，并在操作过程中轻拿轻放
。2.
根据权利要求1所述的无菌蜜蜂的培育方法，其特征在于，在步骤
(1)
中：用囚王笼限制蜂王产卵1‑2周；蜂王在蜂王产卵控制器中的产卵时间为
20
‑
24h。3.
根据权利要求1所述的无菌蜜蜂的培育方法，其特征在于，在步骤
(2)
中：所述无菌蔗糖水的质量浓度为
48
％
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：谢宪兵，邹节新，王义兵，万小娟，许宝华，郑双艳，汪杨，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：