基于拓扑捕获的制造技术

本申请公开了具有改进的高通量逆转录

【技术实现步骤摘要】
基于拓扑捕获的RNA样本处理系统


[0001]本专利技术涉及一种在由选择性透过膜包围而成的反应隔室中分离待分析物
(
例如：细胞
、
细菌
、
病毒
、
核酸
、
生化化合物和
/
或其他材料
)
及靶向捕获生物分子的系统和方法，并通过反应
/
流程处理封装的生物分子以执行多步骤反应
。
来源于同一待分析物的生物分子通过特异性的捕获试剂富集在由选择性透过膜包围而成的反应隔室中
。
其余生物分子可自由通过选择性透过膜，从而实现纯化
、
清洗或多步反应所需要的各种反应物质交换
。
在用外部刺激处理后，捕获富集的生物分子及其反应的衍生物，可以在所需的步骤从选择性透过膜包围而成的反应隔室中释放出来
。
本专利技术揭示的方法举例说明了使用选择性透过膜包围而成的反应隔室对单个细胞进行基因型或表型分析
。

技术介绍

[0002]全基因组范围内的转本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于拓扑捕获的
RNA
样本处理系统，其包括：
a)
作为反应隔室外层的选择性透过膜，所述选择性透过膜能够选择性地透过
RNA
样本处理试剂；
b)
位于所述反应隔室内部的内容物，内容物包括
RNA
捕获试剂和待分析
RNA
；其中，所述待分析
RNA
与所述
RNA
捕获试剂连接成整体，或待分析
RNA
与所述
RNA
捕获试剂通过相互作用形成复合物，或待分析
RNA
与所述
RNA
捕获试剂经过生物或化学反应生成转化后形成的脱氧核糖核酸
(DNA)
和
/
或核糖核酸
(RNA)
的核酸内容物；所述选择性透过膜能够选择性地留存
RNA
捕获试剂和待分析
RNA
连接而成的整体或复合物或核酸内容物；所述整体或复合物或核酸内容物的直径大于所述选择性透过膜的膜孔的孔径的
1/2。2.
根据权利要求1所述的基于拓扑捕获的
RNA
样本处理系统，其中，位于所述反应隔室内部的
RNA
捕获试剂
、
待分析
RNA
，以及所述
RNA
捕获试剂和待分析
RNA
连接而成的整体或复合物，或所述转化后形成的脱氧核糖核酸
(DNA)
和
/
或核糖核酸
(RNA)
的核酸内容物为液态
、
胶状或半液态；所述反应隔室内部还包含渗透压调节剂；优选所述渗透压调节剂是葡聚糖
。3.
根据权利要求1～2中任一项所述的基于拓扑捕获的
RNA
样本处理系统，其中，所述捕获试剂为由带双键的寡核苷酸引物自身聚合而成的胶状高分子化合物或带双键的寡核苷酸引物与一种或多种带双键的化合物单体聚合而成的胶状高分子化合物；所述
RNA
捕获试剂与所述待分析
RNA
进行逆转录反应得到直径大于选择性透过膜孔径的
1/2
的产物分子
。4.
根据权利要求3所述的基于拓扑捕获的
RNA
样本处理系统，其中，所述
RNA
捕获试剂与所述待分析
RNA
进行逆转录反应后，进行
PCR
扩增反应，得到直径大于选择性透过膜孔径的
1/2
的产物分子
。5.
根据权利要求1～4中任一项所述的基于拓扑捕获的
RNA
样本处理系统，其中，所述待分析
RNA
，以及所述
RNA
捕获试剂和待分析
RNA
连接成整体或复合物，或所述转化后形成的脱氧核糖核酸
(DNA)
和
/
或核糖核酸
(RNA)
的核酸内容物后，进一步地通过以下的第二捕获试剂进行捕获：所述第二捕获试剂为
DNA
转座酶和
DNA
的复合物；优选所述
DNA
转座酶为
Tn5
，所述
DNA
在其末端具有转座酶识别序列
。6.
根据权利要求1～5中任一项所述的基于拓扑捕获的
RNA
样本处理系统，其中，所述待分析
RNA
来源于同一个细胞或细胞核；优选所述待分析
RNA
处于完整的细胞或细胞核中
。7.
制造根据权利要求1至6的任一项所述的基于拓扑捕获的
RNA
样本处理系统的方法，其包括如下步骤：准备包括透压调节剂和第一水性溶剂的第一相；准备混合有选择性透过膜形成材料和第二水性溶剂的第二相；
RNA
捕获试剂添加在第一相或第二相中；将处于完整的细胞或细胞核中的待分析
RNA
混合至第一相或第二相；优选将处于完整
的细胞或细胞核中的待分析<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张经纬，刘铁民，李婷，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：