RUNX2制造技术

本公开提供一种检测样本中

【技术实现步骤摘要】
RUNX2多肽突变体在制备评估颅锁骨发育不良患者的试剂盒中的应用
[0001]本申请是申请日为
2022
年
06
月
20
日
、
申请号为
202210697983.3、
专利技术名称为
RUNX2
基因突变在制备筛查颅锁骨发育不良患者的试剂盒中的应用的专利申请的分案申请
。


[0002]本公开涉及分子生物学
，具体涉及一种检测样本中
RUNX2
多肽突变体在制备评估颅锁骨发育不良患者的试剂盒中的应用
。

技术介绍

[0003]骨骼的形成和重建主要是骨祖细胞和软骨祖细胞的分化
、
增殖和细胞外基质的形成，这些过程离不开一些列相关基因的激活和抑制，转录因子对这些基因起着重要的调控作用
。
成骨细胞和破骨细胞间的动态平衡是保证牙齿正常萌出的基础，若平衡失调可能会导致牙齿萌出障碍
。
颅锁骨发育不良
(Cleidocranial Dysplasia
，
CCD)
是一种典型的牙齿萌出障碍性疾病，属于累及牙齿和骨骼的常染色体显性遗传性疾病，具有高外显率和不同的表型，有明显的家族聚集性，男女发病率无明显差别
。
颅锁骨发育不良典型的临床症状包括囟门闭合延迟，颅骨缝增宽，锁骨钙化不良
、
缺失，锥形胸，耻骨联合增宽而致骨盆发育不良，身材矮小，上颌骨发育不足，有多生牙，乳牙滞留，恒牙萌出延迟等
。
[0004]RUNX2
基因
(RUNX
家族转录因子
2)
又称为核心结核因子
α
1、
多瘤病毒增强子结合蛋白或急性髓系白血病因子，其位于人常染色体
6p21
，长约
220kb。RUNX2
属于
RUNXx
相关因子
(RUNt
‑
related gene)
家族，
RUNXx
相关因子是一类转录因子的总称，它们都是由
α
和
β
亚单位构成的异二聚体，
RUNXx
家族主要包括
RUNX1
基因
、RUNX2
基因和
RUNX3
基因，
RUNX2
具有和其他家族成员相似的
RUNT
结构域
。RUNX2
是骨发育过程中调节骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化和成熟最关键的转录因子，
RUNX2
的表达是成骨细胞开始分化的标志，因此它是骨形成过程中最早和最特异性的标志基因，
RUNX2
包括
N
端的多谷氨酰胺
/
丙氨酸重复序列结构域
(Q/A)、
中部的
RUNT
结构域以及
C
端的富含脯氨酸
、
丝氨酸及苏氨酸的
PST
结构域
。RUNX2
基因的错义突变
、
无义突变
、
基因插入
/
缺失突变或者移码突变等都是造成颅锁骨发育不良的重要原因
。
[0005]虽然现在已有较多颅锁骨发育不良致病与
RUNX2
基因的研究，但是，目前该疾病致病基因突变的筛选和验证分析工作远远不够，仍存在未知致病基因位点
。
鉴定新的颅锁骨发育不良的致病基因位点，无论对于疾病早期诊断
、
管理还是指导优生优育都具有重要意义
。
因此，本领域迫切需要开发新的颅锁骨发育不良致病基因及其相关的致病突变位点
。

技术实现思路

[0006]本公开有鉴于上述现有技术的状况而完成，其目的在于提供一种新的颅锁骨发育不良相关致病基因突变位点
。
[0007]为此，本公开第一方面提供了一种检测样本中
RUNX2
基因突变的试剂在制备筛查
颅锁骨发育不良患者的试剂盒中的应用，所述基因突变为
RUNX2 c.1550delT
，也即所述基因突变为野生型
RUNX2
基因的核苷酸序列的第
1550
位碱基
T
的缺失
。
在本公开中，通过
RUNX2c.1550delT
这一基因突变作为标志物，能够对筛查颅锁骨发育不良患者进行筛查，进而提供了一种检测样本中
RUNX2
基因突变的试剂在制备筛查颅锁骨发育不良患者的试剂盒中的应用
。
[0008]在本公开第一方面所涉及的应用中，可选地，所述试剂盒可以应用于以下技术的至少一种：
DNA
测序
、
限制性酶切片段长度多态性
、
单链构象多态性
、
变性高效液相色谱
、SNP
芯片
、
微流控芯片技术
、TaqMan
探针技术和
Sequenom MassArray
技术
。
由此，能够应用这些技术对
RUNX2
基因突变位点进行检测
。
[0009]在本公开第一方面所涉及的应用中，可选地，所述试剂盒包括用于扩增
RUNX2
基因的引物对和
/
或用于检测
RUNX2 c.1550delT
的探针
。
由此，能够使用该引物对和
/
或探针对
RUNX2
基因进行检测
。
[0010]在本公开第一方面所涉及的应用中，可选地，所述检测
RUNX2c.1550delT
的探针根据人基因组中
RUNX2
基因编码区第
1550
位碱基的序列进行设计
。
由此，能够对
RUNX2 c.1550delT
这一突变进行检测
。
[0011]在本公开第一方面所涉及的应用中，可选地，所述试剂盒还包括
dNTPs、DNA
聚合酶和
PCR
反应缓冲液
。
由此，能够对
RUNX2
基因进行扩增
。
[0012]在本公开第一方面所涉及的应用中，可选地，所述试剂盒包括实时荧光定量检测试剂，所述实时荧光定量检测试剂包含用于实时荧光定量检测
RUNX2
新突变位点基因表达的引物，上游引物的序列包括5’‑
CTCTTCCCAAAGCCAGAGTG
‑3’
，下游引物的序列包括5’‑
GCAGACAGCTCACAAAACCAG
‑3’
。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测样本中
RUNX2
多肽突变体的试剂在制备评估颅锁骨发育不良易感性的试剂盒中的应用，其特征在于，所述多肽突变体为
RUNX2 p.W518Gfs
，并且
RUNX2 p.W518Gfs
位于
PST
域
。2.
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样本来自于被检测者，所述被检测者为普通人群
、
疑似颅锁骨发育不良的个体或颅锁骨发育不良的高风险人群
。3.
根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述多肽突变体由
RUNX2 c.1550delT
突变导致，使
RUNX2
基因编码的氨基酸序列的第
518、519、520、521
位的色氨酸
、
精氨酸
、
脯氨酸
、
酪氨酸被替换
。4.
根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒通过提取所述被检测者的基因组
DNA
并对所述基因组
DNA
进行检测，获得
RUNX2 c.1550delT
突变的检测结果
。5.
根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述颅锁骨发育不良患者的
RUNX2
基因中存在至少一个
RUNX2c.1550delT
突变，所述
RUNX2 c.1550delT
突变为野生型
RUNX2
基因的核苷酸序列的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽，任建民，侯新国，龚蕾，刘福强，孙玉静，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：