本发明专利技术公开了一种检测枣酊中酸枣仁皂苷和当药黄酮素含量的方法，其特征在于：以乙腈与０．１％甲酸水溶液的混合液为流动相，采用高效液相色谱法进行检测，其中高效液相色谱所采用的检测器为蒸发光散射检测器（ＥＬＳＤ）。本发明专利技术的检测枣酊中酸枣仁皂苷和当药黄酮素含量的方法，乙腈和甲酸水溶液可以同时作为流动相和样品的萃取剂，使样品的前处理较为简单，而且高效液相色谱的检测器采用蒸发光散射检测器（ＥＬＳＤ），被测目标物在该检测器上的信号较强，有较好的匹配性，而且形成了较好的函数对应关系，提高了检测的准确度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于痕量分析
技术介绍
红枣是一种营养丰富的果实，其中含有多种营养物质，比如皂苷类，黄酮类，生物 碱类，糖类，氨基酸类。枣仁中可以分离得到酸枣仁皂苷A和B;红枣的种子中还能提取出 黄酮C-葡萄糖甙(即当药黄酮素或当药黄素)，当药黄酮素和酸枣仁皂苷都是具有提高免疫 等保健功效的活性物质。枣酊是常见的烟用香精香料，在烟草制品的加香、矫味中经常使 用。当前随着烟用香精香料品质控制日益收到关注，香原料的主要成分及特有成分，尤其是 具有这些具有免疫保健功效的成分的分析检测也成为热点。目前针对酸枣仁皂苷A和B常用的是高效液相色谱结合二极管阵列检测器(DAD 检测器)的检测方法，但是经过对比酸枣仁皂苷A和B在DAD检测器上的相应强度并不理 想，从而影响检测精准度。而且同时检测酸枣仁皂苷及当药黄酮素的方法未见报导。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测准确度且能够同时检测枣酊中酸枣仁皂苷和当药 黄酮素含量的方法。为了实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是一种检测枣酊中酸枣仁皂苷和 当药黄酮素含量的方法，其是以乙腈与0. 1%甲酸水溶液的混合液为流动相，采用高效液相 色谱法进行检测，其中高效液相色谱所采用的检测器为蒸发光散射检测器(ELSD )。所述流动相中乙腈与0. 1%甲酸水溶液的体积比为60 :4(T75 :25。本专利技术的检测方法具体步骤如下1)标准工作曲线制定在0.014-0.19mg/ml范围内用流动相配制含有当药黄酮素、酸 枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的三种标准品的至少三个浓度的混合标准溶液，再利用高效液 相色谱仪分别对上述所有浓度的混合标准溶液中的三种标准品的含量进行检测，并根据三 种标准品的峰面积和相应的浓度分别绘制三种标准品的标准工作曲线并计算得到其回归 方程；2)样品的预处理称取枣酊样品于加入流动相，经过超声萃取后离心处理，取上层清 液，过滤得到样品溶液；再利用高效液相色谱仪采用与步骤1)相同的条件分别对样品溶液 进行检测，并根据得到的峰面积分别带入标准工作曲线的回归方程中，计算出样品中的当 药黄酮素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量；步骤1)、2)中的高效液相色谱条件为色谱柱C18 (4. 6X 150mm)；流速0. 8ml/min ； 蒸发光散射检测器条件漂移管温度79、1. 5°C ；气流量-.2. (T2. 2L/min。所述混合标准溶液中当药黄酮素的浓度范围为0. 038-0. 19mg/ml，酸枣仁皂苷A 的浓度范围为0. 01-0. lmg/ml，酸枣仁皂苷B的浓度范围为0. 014-0. 14mg/ml。本专利技术的检测枣酊中酸枣仁皂苷和当药黄酮素含量的方法，乙腈和甲酸水溶液可 以同时作为流动相和样品的萃取剂，使样品的前处理较为简单，而且高效液相色谱的检测 器采用蒸发光散射检测器(ELSD)，被测目标物在该检测器上的信号较强，有较好的匹配性， 而且形成了较好的函数对应关系，提高了检测的准确度。另外，本专利技术通过优化流动相中有 机相比例，及ELSD漂移管的温度和载气流量，提高了被测目标物在色谱柱上的分离度，减 少了色谱基线噪音，获得了将为明显的色谱峰，提高了检测准确度。附图说明图1为混合标准溶液的色谱图； 图2为当药黄酮素的标准工作曲线图； 图3为酸枣仁皂苷A的标准工作曲线图； 图4为酸枣仁皂苷B的标准工作曲线图； 图5为当药黄酮素的标准双对数曲线图； 图6为酸枣仁皂苷A的标准双对数曲线图； 图7为酸枣仁皂苷B的标准双对数曲线图； 图8为对比实验示意图。具体实施例方式以下结合具体实施例对本专利技术的方法做详细的介绍本专利技术的检测枣酊中酸枣仁皂苷和当药黄酮素含量的方法具体包括如下步骤 高效液相色谱条件色谱柱YMC-0DS-AC18 (4. 6 X 150mm, 5 u m)；流动相乙腈-0. 甲酸水溶液=60 40；流速0. 8ml/min ；进样量:5u 1 ；蒸发光散射检测器条件漂移管温度81. 5°C ；气流量2. 2L/min。1)标准工作曲线的制定分别准确称取当药黄酮素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B标准品4. 8mg、2. 5mg、3. 5mg 于同一 25ml容量瓶中，用流动相溶解稀释并定容至刻度线，得到三种标准品的标准溶液储 备液，采用该储备液用流动相稀释配制系列浓度的混合标准溶液，使得当药黄酮素、酸枣仁 皂苷A和酸枣仁皂苷B的浓度范围分别是0. 038 — 0. 19mg/ml，0. 01 — 0. lmg/ml，0. 014 — 0. 14mg/ml，对此系列浓度的标准混合溶液进行高效液相色谱检测，具体混合标准溶液的配 制及相应检测的峰面积如表1和图1所示图1中峰1和峰2为当药黄酮素的色谱峰，峰3 和峰4分别为酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的色谱峰，图1中的色谱峰明显且锐利，基线平 稳且无噪音，说明本专利技术采用的ELSD检测器在优化条件后产生了较好的分析效果。表1标准混合溶液的浓度及相应检测结果<table>table see original document page 5</column></row><table>根据表1中的浓度及相应峰面积数据作图，其中当药黄酮素同时出峰1和峰2，工 作曲线根据两个峰面积之和进行计算。具体的计算结果如图2-4及表2所示。表2标准工作曲线参数<table>table see original document page 5</column></row><table>当药黄酮素、酸枣仁皂苷A和B在各自浓度范围内，浓度/峰面积呈现幂指数函数 关系，如图2、3、4所示。对酸枣仁皂苷A和B标准品各浓度和峰面积分别取自然对数，然后 作图，如图5、6、7所示，酸枣仁皂苷A和B在ELSD检测器上的信号与标准品浓度之间符合 双对数线性关系，被测目标物与ELSD检测器具有较好的匹配性。2)样品的检测取枣酊样品0. 1克左右置于具塞三角瓶中，移取40ml流动相至三角瓶中，置于超声辅 助萃取器中超声萃取30分钟以上，取溶液10ml至离心管中于4000rpm离心10分钟，取上 层清液，经0. 45 y m针式滤头过滤，得到样品溶液。将样品溶液采用步骤1)相同条件的高效液相色谱仪进行检测，将得到的当药黄酮 素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的色谱峰分别带入相应的回归方程中，得到样品溶液中当 药黄酮素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的浓度，从而计算出样品中当药黄酮素、酸枣仁皂 苷A和酸枣仁皂苷B的含量。本专利技术的检测效果 1、检测限及定量限取各标准品工作曲线最低浓度重复检测，计算标准偏差和相对标准偏差。分别以3倍 和10倍标准偏差作为检测限和定量限。具体数据如表3所示。表3检测限及定量限<table>table see original document page 6</column></row><table>2、精密度及加标回收率取已知浓度枣酊样品，按照不同水平分别添加三种标准品，测定方法加标回收率。加标 水平和实际检测的结果如表4所示。表4加标水平和加标回收率<table>table see 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测枣酊中酸枣仁皂苷和当药黄酮素含量的方法，其特征在于：以乙腈与０．１％甲酸水溶液的混合液为流动相，采用高效液相色谱法进行检测，其中高效液相色谱所采用的检测器为蒸发光散射检测器（ＥＬＳＤ）。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡斌，王昇，郭吉兆，王洪波，郭军伟，蔡君兰，张晓兵，谢复炜，刘惠民，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]
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