TRIM25制造技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及

【技术实现步骤摘要】
TRIM25基因作为靶点在抑制H9N2流感病毒复制中的应用


[0001]本专利技术属于生物基因工程
，具体涉及一种
TRIM25
基因作为靶点在抑制
H9N2
流感病毒复制中的应用
。

技术介绍

[0002]H9N2
流感病毒属于正黏病毒科
(Orthomyxoviridae)A
型流感病毒
(Influenza A virus
，
IAV)
属，是一种分节段的单股负链
RNA
病毒
。
流感病毒的自然宿主为野生的水禽和水鸟，
H9N2
亚型流感病毒宿主范围在不断扩大，可以感染包括人类在内的多种哺乳动物，对公共卫生安全造成巨大威胁
。H9N2
是最常见的低致病性流感病毒，本身不会直接引起明显的临床症状，但是它的感染会抑制家禽的免疫反应，且病程较长，容易引发其他病原体的继发感染，从而对家禽造成严重损伤甚至死亡，对家禽养殖业造成重大的损失
。
目前，疫苗接种仍是我国控制
H9N2
流感的主要策略之一
。
然而，多种抗原构成不同的
H9N2
病毒在我国流行，疫苗的开发速度滞后于病毒突变的速度，给有效的疫苗接种带来了挑战，开发一种具有广谱中和活性良好的通用疫苗对
H9N2
的控制具有重要意义
。
因此，对
H9N2
流感病毒进行更多的研究，揭示更多病毒蛋白调控宿主免疫反应的机制尤为关键
。
[0003]TRIM25
是一种
E3
泛素连接酶，泛素化是指在泛素激活酶
E1、
泛素偶联酶
E2
和泛素连接酶
E3
的协同作用下，将泛素与特定的靶蛋白结合的过程
。
最初的研究发现泛素化参与了蛋白质的降解，随着研究的深入，发现泛素化也可以介导蛋白质之间的相互作用和细胞信号转导等过程
。TRIM25
是第一个被鉴定的免疫调节
TRIM
蛋白，它通过控制
K63
型多聚泛素链修饰
CARDs
调节
RIG
‑
I
的活性，这是一种非降解类型的泛素化，通过诱导
RIG
‑
I
寡聚化，随后被招募到
MAVS
中，从而触发下游抗病毒基因的表达
。
现有研究表明，
TRIM25
表达能够抑制口蹄疫病毒
、
甲型流感病毒
、
传染性法氏囊和狂犬病毒
。
[0004]本专利技术意外发现，与口蹄疫病毒
、
甲型流感病毒
、
传染性法氏囊和狂犬病毒等相反的是，
TRIM25
表达反而能促进
H9N2
流感病毒的复制，
TRIM25
或其表达促进剂可作为
H9N2
流感病毒的复制或生产增效剂，用于
H9N2
流感病毒或疫苗的生产；而抑制
TRIM25
表达能够抑制
H9N2
流感病毒的复制，可作为靶点用于制备抑制
H9N2
流感病毒复制的药物
。
基于此，本专利技术以
TRIM25
基因为靶点，设计了一种特异性靶向
TRIM25
基因的
sgRNA
，所述的
sgRNA
能够特异性靶向
TRIM25
基因，结合
CRISPR
‑
Cas9
技术实现了
TRIM25
基因敲除，获得的单克隆细胞系对
H9N2
流感病毒具有抗性表型，能够显著抑制
H9N2
流感病毒在细胞内的复制，为研究
TRIM25
基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供了研究工具和材料，也可用于抗
H9N2
流感病毒的动物育种
。

技术实现思路

[0005]针对上述技术问题，本专利技术首先发现通过抑制或沉默宿主
TRIM25
基因，能够抑制
H9N2
流感病毒的复制，可作为靶点用于制备抑制
H9N2
流感病毒复制的药物；其次，本专利技术提供了一种特异性靶向
TRIM25
基因的
sgRNA
，所述的
sgRNA
能够特异性靶向
TRIM25
基因，结合
CRISPR
‑
Cas9
技术实现了
TRIM25
基因的敲除，获得的单克隆细胞系对
H9N2
流感病毒具有抗性表型，能够显著抑制
H9N2
流感病毒在细胞内的复制，进一步地，通过
TRIM25
基因作为靶点能够筛选用于预防或治疗
H9N2
流感病毒感染药物，为
H9N2
流感病毒的防控提供新思路为；最后，本专利技术发现，过表达
TRIM25
后，能够显著促进
H9N2
流感病毒的复制，因此，
TRIM25
或其表达促进剂可作为
H9N2
流感病毒的复制或生产增效剂，用于
H9N2
流感病毒或疫苗的生产；且过表达
TRIM25
的细胞系可作为
H9N2
流感病毒或疫苗的生产细胞系
。
[0006]具体包括以下内容：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种
TRIM25
基因
/
蛋白作为靶点在筛选用于预防或治疗
H9N2
流感病毒感染药物中的应用，所述药物以
TRIM25
基因
/
蛋白为靶点，抑制或者沉默
TRIM25
基因
/
蛋白的表达
。
[0008]第二方面，本专利技术提供了
TRIM25
基因
/
蛋白表达抑制剂的在制备预防或治疗
H9N2
流感病毒感染药物中的应用
。
[0009]优选地，所述抑制剂为干扰
TRIM25
基因
/
蛋白表达的
RNA
片段，或靶向
TRIM25
基因
/
蛋白的
SgRNA
，或下调
TRIM25
基因
/
蛋白表达的小分子化合物
。
[0010]优选地，所述抑制剂为靶向
TRIM25
基因
/
蛋白的
SgRNA。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.TRIM25
基因
/
蛋白作为靶点在筛选用于预防或治疗
H9N2
流感病毒感染药物中的应用，其特征在于，所述药物以
TRIM25
基因
/
蛋白为靶点，抑制或者沉默
TRIM25
基因
/
蛋白的表达
。2.TRIM25
基因
/
蛋白表达抑制剂的在制备预防或治疗
H9N2
流感病毒感染药物中的应用
。3.
如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为干扰
TRIM25
基因
/
蛋白表达的
RNA
片段，或靶向
TRIM25
基因
/
蛋白的
SgRNA
，或下调
TRIM25
基因
/
蛋白表达的小分子化合物
。4.
如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述靶向
TRIM25
基因
/
蛋白的
SgRNA
的序列为：
TRIM25
‑
sgRNA
‑
F
：5’‑
GGGAGCCACCCGCCGACGTC
‑3’
；
TRIM25
‑
sgRNA
‑
R
：5’‑
GACGTCGGCGGGTGGCTCCC
‑3’
。5.
一种特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾艳，罗嘉伟，曹欣，程明扬，行鑫园，卢妹，王春凤，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：