微囊藻毒素ＬＲ的单链抗体的筛选方法及其鉴定技术

本发明专利技术涉及一种微囊藻毒素ＬＲ的单链抗体的筛选方法及其鉴定。是将生物素化的微囊藻毒素ＬＲ利用亲和素标记磁珠和负筛选方法，在人源合成抗体库中进行两轮亲和筛选；再对第二轮产出的噬菌体克隆提取总质粒ＤＮＡ，经过Ｓｆｉ?Ｉ酶切后胶回收得到单链抗体基因，与同样酶切后的可溶性表达的载体ｐＡＫ１００ＣＬ进行连接，连接后的载体电转化入大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中，获得可溶性表达的单链抗体；用竞争型时间分辨荧光免疫分析法，对可溶性表达的单链抗体进行鉴定。其优点是：本发明专利技术具有筛选快速简便，并能更好的将微囊藻毒素ＬＲ立体结构暴露于孵育体系中；同时对筛选结果的鉴定，具有检测信号高、抗基质干扰能力强的优点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种微囊藻毒素ＬＲ的单链抗体的筛选方法，是将半抗原利用亲和素标记磁珠和负筛选方法，在人源合成抗体库中进行两轮亲和筛选，获得能够展示型表达微囊藻毒素ＬＲ特异性单链抗体的Ｍ１３丝状噬菌体克隆；再将第二轮筛选获得的噬菌体克隆的单链抗体基因与可溶性表达载体连接，转入大肠杆菌进行表达，获得可溶性表达的单链抗体，其特征在于：所述的半抗原为生物素化的微囊藻毒素ＬＲ；所述的可溶性表达载体为ｐＡＫ１００ＣＬ；所述的转入大肠杆菌进行表达是指：对第二轮产出的噬菌体克隆提取总质粒ＤＮＡ，经过ＳｆｉＩ酶切后胶回收得到单链抗体基因，再与同样酶切后的可溶性表达的载体ｐＡＫ１００ＣＬ进行连接，连接后的载体电转化入大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘媛，刘贤金，梁颖，张存政，王耘，温爽，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]