一种转基因动物模型及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种转基因动物模型及其构建方法和应用

【技术实现步骤摘要】
一种转基因动物模型及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种转基因动物模型及其构建方法和应用，尤其涉及一种生长板软骨细胞肥大
、
异位骨化和骨关节炎的转基因动物模型及其构建方法和应用
。

技术介绍

[0002]哺乳动物的骨骼发育始于胚胎期的透明软骨形成
。
来自骨膜的成骨细胞分布在透明软骨周围，形成致密的骨，形成骨干和海绵状骨，称为初级骨化中心
。
来自造血系统的破骨细胞破坏海绵状骨，形成髓腔
。
随着髓质腔
(
钙化
)
的持续形成；哺乳动物出生后，在轴后原始透明软骨的两极部位
(
骨骺
)
形成二次骨化中心
。
二级骨化中心形成后，软骨将被海绵骨替代，但保留完整的关节软骨和由软骨细胞组成的生长板
(
骺板
)。
持续的软骨细胞增殖和肥大导致出生后骨骼钙化和发育
。
与人类不同，小鼠生长板中软骨细胞的增殖和钙化没有终本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种转基因动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、
构建
Axin1
flox/flox
转基因小鼠和
Agc1
‑
CreER
转基因小鼠；
S2、
选取成年
Axin1
flox/flox
转基因小鼠和
Agc1
‑
CreER
转基因小鼠进行交配，培育出
Axin1
Agc1ER
条件敲除小鼠；
S3、
对成年的
Axin1
Agc1ER
条件敲除小鼠腹腔内注射他莫昔芬，持续注射5天；
S4、
在建模期间定期检测
Axin1
Agc1ER
条件敲除小鼠的生化指标，并进行组织学和组织形态计量学分析；
S5、
当
Axin1
Agc1ER
条件敲除体同时发生生长板软骨细胞肥大
、
异位骨化和膝关节软骨退化病证，即获得所述转基因动物模型
。2.
如权利要求1述的转基因动物模型的构建方法，其特征在于：所述步骤
S2
具体为将成年的成年雌性
Axin1
flox/flox
转基因小鼠和雄性
Agc1
‑
CreER
转基因小鼠进行交配，或者将成年的成年雄性
Axin1
flox/flox
转基因小鼠和雌性
Agc1
‑
CreER
转基因小鼠进行交配；待新生鼠长至2‑3周时，取1‑
3mm
小鼠尾尖进行小鼠基因型鉴定，将裂解液加入到所需裂解的组织中，涡旋振荡后水浴中孵育，涡旋振荡充分混匀后取上清得到裂解产物；对裂解产物中
Axin1、CreER
进行
PCR
扩增，琼脂糖凝胶电泳检测出
Axin1、CreER
扩增条带的裂解产物对应的新生小鼠即为
Axin1
Agc1ER
条件敲除小鼠
。3.
如权利要求2述的转基因动物模型的构建方法，其特征在于：所述裂解液包括2μ
l pH
为
7.5
的
Tris
‑
Hcl、20
μ
l pH
为
8.0
的
0.5M EDTA、6
μ
l

【专利技术属性】
技术研发人员：陈棣，易丹，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：