本发明专利技术公开了南瓜蛋白在制备治疗胰腺癌药物中的应用。南瓜蛋白单用时对体外培养的多株胰腺癌细胞均具有显著的增殖抑制作用，对人胰腺癌小鼠皮下移植瘤及胰腺原位移植瘤均具有明显的抑制作用，说明南瓜蛋白在体外及体内均具有抗胰腺癌作用；南瓜蛋白与吉西他滨联用时，对胰腺癌细胞的增殖抑制作用明显增强，具有协同作用。因而，南瓜蛋白可单用及与吉西他滨联合用于治疗胰腺癌。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及南瓜蛋白在制备治疗胰腺癌药物中的应用，尤其涉及南瓜蛋白与吉西 他滨联合应用治疗胰腺癌的用途。
技术介绍
胰腺癌是常见的消化系统恶性肿瘤，发病率逐年上升。由于发病隐袭和高度进 展性，胰腺癌早期诊断十分困难，大多数患者在确诊时已是晚期(局部晚期或发生远处转 移)，手术切除率低(< 15%)，即使行根治性切除术，多数病人出现术后短期复发转移，治 疗棘手，病死率高，90%的病人在确诊后1年内死亡，5年生存率不到5%。化疗是手术后病 人和失去手术机会的病人提高生存率的主要治疗手段，也是胰腺癌综合治疗的重要组成部 分。多年来用于胰腺癌化疗的主要是细胞毒类抗肿瘤药物(氟尿嘧啶、吉西他滨和钼类等) 和近年来发展起来的靶向药物(如EGFR及VEGF的单抗及相应的酪氨酸激酶抑制剂)，其 中，吉西他滨疗效最好，美国NCCN指南已将吉西他滨和以其为基础的联合方案推荐为晚期 胰腺癌治疗及术后辅助化疗的标准方案。但目前疗效并不令人满意，尤其对晚期胰腺癌，吉 西他滨的客观缓解率也仅12%，而且无论是吉西他滨单药化疗还是联合化疗，患者的中位 生存期均未能超过9个月。因此积极开发高效、低毒、多靶点作用的新药，尤其是能与现有 化疗药物产生协同作用的药物与联合治疗方案已成为胰腺癌治疗的迫切任务与研究热点。核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein, RIP)广泛存在于高等植物 中，通常按结构不同分为两型I型RIP为单链蛋白，如天花粉蛋白(TCS)，在植物RIP中占 多数；II型RIP是通过二硫键连接的双链蛋白，如蓖麻毒素(ricin)。I型RIP与II型RIP 的A链一样，是一类RNA N-糖苷酶或多核苷酸腺苷糖苷酶，能专一地水解真核细胞核糖体 28S rRNA第4324位上的腺嘌呤碱基与核糖之间的N-C糖苷键，释放出一个腺嘌呤碱基，从 而阻遏了延长因子与核糖体的结合，抑制蛋白质的生物合成，具有抗生育、抗病毒和抗肿瘤 等多种生物学活性。由于II型RIP的B链具有凝集素的功能，可识别正常细胞表面的 D-半乳糖，因而有很大的毒性，限制了其在人体内的应用。而I型RIP由于不具有B链，对 人体的毒性较小，作为抗肿瘤药物更具应用前景。然而，不同的I型RIP其抗肿瘤活性并不 相同(相差可达10倍以上)，因而从植物中筛选高活性的I型RIP成为有关研究人员努力 的方向。南瓜蛋白(cucurmosin，CUS)是从南瓜瓜瓤中提取的新的1型核糖体失活蛋白， 为碱性单肽链糖蛋白。我们测定了其氨基酸序列和DNA顺序，培养出单晶并测定了其结构 (Chen MH，Ye XM，Cai JH，et al. Crystallization andpreliminary crystallographic study of cucurmosin， a ribosome-inactivating proteinfrom the sarcocarp of cucurbita moschata. Acta Cryst 2000 D56 665-666 ；Shi XL, Zhou EX, Ye XM, et al.Molecular replacement studies of cucurmosin from Cucurbitamoschata structure homology with trichosanthin. Chinese J Struct Chem,2003,22 165-168;陈明晃，叶晓明.一种多肽-具有南瓜蛋白的N端顺序的多肽.中国，专利技术专利，03135045. 3，2003-09-29 ；陈明晃，谢捷明，等.南瓜蛋白及其编码基因.中国，专利技术 专利，200710008402. 6，2007-01-10)。我们前期的研究表明能显著抑制多种肿瘤(肝癌、 胃癌、乳腺癌、宫颈癌、肺癌和黑色素瘤)细胞增殖及诱导凋亡(谢捷明，陈明晃，等.南瓜 蛋白在制药中的应用.中国，专利技术专利，200510119741. 2,2005-11-03)，且活性比同类 的天花粉蛋白强4-7倍，而对人正常肝细胞株和外周血淋巴细胞的抑制作用较小，表现出 明显的选择性。我们近期发现，南瓜蛋白对AsPC-l、BxPC-3、CFPAC-l和PANC-1等多株人胰 腺癌细胞均具有显著的增殖抑制作用，南瓜蛋白与吉西他滨具有协同抗PANC-1细胞作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是通过研究南瓜蛋白单用及南瓜蛋白与吉西他滨联合应用时的抗 胰腺癌活性，提供南瓜蛋白在制备治疗胰腺癌药物中的应用。本专利技术的专利技术人的研究表明，南瓜蛋白对体外培养的多种人胰腺癌细胞株均具有 显著的增殖抑制作用，对人胰腺癌小鼠皮下移植瘤及胰腺原位移植瘤均具有明显的抑制作 用；南瓜蛋白与吉西他滨联用时，对胰腺癌细胞的增殖抑制作用明显增强，具有协同作用。 因而，南瓜蛋白可单用及与吉西他滨联合用于治疗胰腺癌。具体实施例方式下面用具体的实施例分别说明南瓜蛋白单用及南瓜蛋白与吉西他滨联合应用时 对人胰腺癌细胞的增殖抑制作用。实施例1 南瓜蛋白对体外培养的人胰腺癌细胞的增殖抑制作用(一 )南瓜蛋白对体外培养的人胰腺癌PANC-1细胞的增殖抑制作用(MTT法)方法取对数生长期的PANC-1细胞接种于96孔培养板上，每孔接种量为 3000/160 uL0培养24h后，实验组加不同浓度的南瓜蛋白40 y L，每个浓度做6个复孔； 阴性对照组加营养液40 y L，空白对照孔加营养液200 y L，用于仪器调零。作用不同时间 (24h、48h和72h)后，每孔加5g/L的MTT 20 y L，继续培养4h，甩去上清，每孔加二甲亚砜 150 uL.用酶标仪(BI0-RAD产品)测定570nm各孔的吸光度值(A57C1)，各组取平均值，计算 抑制率抑制率=(1-实验组A5TO/对照组A57(i)X100%。用SPSS12.0进行统计学分析，并 计算IC5〇。结果见表1和表3。南瓜蛋白对人胰腺癌PANC-1细胞具有显著的增殖抑制作用， 并且表现为明显的时间依赖性和剂量依赖性。南瓜蛋白作用24h、48h和72h的IC5Q分别为 40. 245 mg/L(1. 427u mol/L)、8. 249 mg/L(0. 292u mol/L)和 1. 778mg/L(0. 063u mol/L)。表1不同浓度和不同时间CUS对胰腺癌细胞PNCA-1的抑制率(n = 4)4 ^ 与对照组 A57Q 比较，P < 0. 05。( 二)南瓜蛋白对体外培养的人胰腺癌细胞系CFPAC-l、AsPC_l和BxPC_3的增殖 抑制作用(SRB法)方法分别取对数生长期的AsPC-1、BxPC-3和CFPAC-1细胞，接种于96孔培养板 上，每孔接种分别为量为3000/100 u L,5000/100 y L禾口 6000/100 u L。培养24h后，实验组 加不同浓度的南瓜蛋白100 y L，每个浓度做3个复孔；阴性对照组加营养液lOOy L，空白 对照孔加营养液200 u L，用于仪器调零。作用72h后，弃上清，每孔加预冷的10%的三氯乙 酸100 iiL，4°C固定lh;倒掉固定液，小孔用去离子水洗5遍，甩干，空气干本文档来自技高网...
【技术保护点】
南瓜蛋白在制备治疗胰腺癌药物中的应用，南瓜蛋白为南瓜瓜瓤中提取的Ⅰ型核糖体失活蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谢捷明，陈明晃，黄鹤光，许春森，吴正财，
申请(专利权)人：福建医科大学，中国科学院福建物质结构研究所，
类型：发明
国别省市：35[中国|福建]
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