一种禽呼肠孤病毒变异毒株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种禽呼肠孤病毒变异毒株及其应用，属于禽呼肠孤病毒毒株的分离和应用领域，本发明专利技术通过对鸡关节肿胀样本进行了病原的分离鉴定与纯化，得到了一株禽呼肠孤病毒株，其保藏编号为

【技术实现步骤摘要】
一种禽呼肠孤病毒变异毒株及其应用


[0001]本专利技术涉及禽呼肠孤病毒毒株的分离和应用领域，具体涉及一种禽呼肠孤病毒变异毒株及其应用
。

技术介绍

[0002]禽呼肠孤病毒
(Avian reovirus
，
ARV)
是呼肠孤病毒科
、
正呼肠孤病毒属中的一种无囊膜
、
线性双股
RNA
病毒，其病毒粒子呈球形为
20
面体对称结构
。ARV
双链
RNA
基因包括
10
个片段，大小大约为
23kb。
这些基因组片段分为3组：
L、M
和
S。L
组为大组包括
L1、L2、L3
三个基因片段；
M
组为中组包括
M1、M2、M3
三个基因片段：
S
组为小组包括
S1、S2、S3、S4
四个基因片段，共有
10
个基因片段可以编码
12
种蛋白，包括参与病毒粒子构成的结构蛋白
λ
A、
λ
B、
λ
C、
μ
A、
μ
B、
σ
A、
σ
B、
σ
C
和不构成成熟粒子的非结构蛋白
μ
NS、p10、p17、
σ
NS。
自
>1985
年王锡坤首次证实我国存在本病以来，各地相继分离到多株
ARV
，各地也纷纷报道了
ARV
的感染
。ARV
会造成肉鸡生长迟缓
、
饲料转化率低
、
羽毛生长不良
、
关节炎和肠道疾病，是能导致肉鸡传染性发育迟缓综合征的病原体之一
。
与其他
RNA
病毒一样，
ARV
易变异，进化出致病力和毒力强弱不等的毒株，可使鸡只因感染不同毒株而出现不同程度的临床症状，但关节炎及肠道疾病仍是其典型症状
。
[0003]但是，目前还没有特效的药物可以用于
ARV
的临床治疗
。
因此，亟需建立快速敏感的检测体系用于
ARV
的早期诊断，准确判定机体的感染状态，对未感染的动物进行有效保护
。
[0004]此外，对于
ARV
感染引起的疾病的防控，除了严格的生物措施外，开发有效的疫苗对于该疾病的综合防控至关重要
。
但是，由于
ARV
变异毒株被不断发现，会导致经典的呼肠孤病毒株疫苗低效或无效，进而引起鸡群大面积发病，生产效益损失严重，因此对于新发现的毒株进行密切追踪研究，并针对性地开发疫苗具有现实意义
。

技术实现思路

[0005]针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种禽呼肠孤病毒变异毒株及其应用
。
本专利技术从发病的鸡的肌腱和盲肠扁桃体中分离得到一株禽呼肠孤病毒变异毒株，并对该禽呼肠孤病毒变异毒株的细胞嗜性
、
致病性和免疫原性进行了检测，建立了针对该禽呼肠孤病毒变异毒株的荧光定量
PCR
检测方法并开发了相关疫苗，为禽呼肠孤病毒的监测和防治提供了保障
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术的第一方面，提供了一株禽呼肠孤病毒变异毒株，其保藏编号为：
CCTCC NO
：
V202380。
[0008]本专利技术的第二方面，提供了所述禽呼肠孤病毒变异毒株在制备禽用疫苗中的应用
。
[0009]进一步的，所述禽用疫苗包括禽呼肠孤病毒灭活疫苗
。
[0010]本专利技术的第三方面，提供了一种预防或治疗禽呼肠孤病毒病的疫苗组合物，所述疫苗组合物含有免疫有效量的灭活的所述的禽呼肠孤病毒株
。
[0011]进一步的，所述疫苗组合物中还含有药学上可接受的佐剂
。
[0012]进一步的，所述疫苗组合物为灭活疫苗
。
[0013]本专利技术的第四方面，提供了一种预防或治疗呼肠孤病毒病灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：
[0014](1)
将保藏编号为
CCTCC NO
：
V202380
的禽呼肠孤病毒接种到
LMH
细胞系中，对禽呼肠孤病毒进行增殖培养后，通过冻融破碎细胞，收取上清液，并进行纯化，获得禽呼肠孤病毒株病毒液；
[0015](2)
将禽呼肠孤病毒株病毒液灭活，加入吐温
‑
80
混合作为水相，以白油
、
硬脂酸铝和司本
‑
80
混合作为油相，将水相和油相混合均匀，乳化，得到预防或治疗禽呼肠孤病毒病的灭活疫苗；
[0016]所述步骤
(2)
中，禽呼肠孤病毒株病毒液灭活的方法为：加入终浓度为
0.15
％的甲醛，
37℃
灭活
24h
；
[0017]所述步骤
(2)
中，所述禽呼肠孤病毒株病毒液与吐温
‑
80
加入的体积比为
96∶4
；所述油相中，白油
、
硬脂酸铝和司本
‑
80
加入的体积比为
95∶1∶5
；所述水相和油相按体积比为
1∶2
进行混合
。
[0018]本专利技术的第五方面，提供了一种用于检测所述禽呼肠孤病毒变异毒株的引物组合，所述引物组合包括上游引物和下游引物，所述上游引物和下游引物为序列如
SEQ ID NO.1
和
SEQ ID NO.2
所示核酸分子
。
[0019]本专利技术的第六方面，提供了引物组合在构建检测所述禽呼肠孤病毒变异毒株的荧光定量
PCR
反应体系中的应用
。
[0020]进一步的，所述荧光定量
PCR
反应体系包括：
Green Premix Pro Taq HS qPCR Mix 10
μ
L
，浓度为
10
μ
mol/
μ
L
的上游引物和下游引物各
0.5
μ
L
，
RNase Free ddH2O 8
μ
L
，待检测的样品
DNA
模板1μ
L。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]本专利技术涉及的禽呼肠孤病毒
2023ARV
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一株禽呼肠孤病毒变异毒株，其保藏编号为：
CCTCC NO:V202380。2.
权利要求1所述禽呼肠孤病毒变异毒株在制备禽用疫苗中的应用
。3.
根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述禽用疫苗包括禽呼肠孤病毒灭活疫苗
。4.
一种预防或治疗禽呼肠孤病毒病的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物含有免疫有效量的灭活的如权利要求1所述的禽呼肠孤病毒株
。5.
根据权利要求4所述疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物中还含有药学上可接受的佐剂
。6.
根据权利要求5所述疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物为灭活疫苗
。7.
一种预防或治疗呼肠孤病毒病灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
将保藏编号为
CCTCC NO:V202380
的禽呼肠孤病毒接种到
LMH
细胞系中，对禽呼肠孤病毒进行增殖培养后，通过冻融破碎细胞，收取上清液，并进行纯化，获得禽呼肠孤病毒株病毒液；
(2)
将禽呼肠孤病毒株病毒液灭活，加入吐温
‑
80
混合作为水相，以白油
、
硬脂酸铝和司本<...

【专利技术属性】
技术研发人员：成子强，周德方，宋振锐，杨琦，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：