苦瓜不同组织和不同成熟期果实的内参基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种苦瓜不同组织和不同成熟期果实的内参基因

【技术实现步骤摘要】
苦瓜不同组织和不同成熟期果实的内参基因及其应用


[0001]本专利技术属于荧光定量
PCR
检测
，更具体地，本专利技术涉及一种苦瓜不同器官和不同成熟期果实的内参基因
、
检测引物及其应用
。

技术介绍

[0002]苦瓜
(Momordica charantia L.)
属于葫芦科一年生攀缘性草本植物，广泛种植于世界热带和亚热带地区
。
苦瓜各种器官的提取物，特别是茎
、
叶和果实，具有显著的药理作用，包括抗糖尿病
、
驱虫
、
抗肿瘤和抗炎等
。
绿熟期的苦瓜果实具有的独特风味和健康益处，性寒味苦
、
营养丰富，含有黄酮
、
多糖
、
生物肽
、
苦瓜甙
、
苦瓜素等活性成分，在我国被当作药膳兼具的蔬菜
。
然而，苦瓜果实作为一种典型的呼吸跃变性果实，采后不久就会迅速黄熟和软化，导致其食用和商业价值急剧下降
。
随着苦瓜遗传改良研究的深入，利用分子生物学技术探究苦瓜成熟相关基因的精确表达模式成为重要的研究内容
。
[0003]实时荧光定量
PCR(qRT
‑
PCR)
技术通常被用于分析目的基因的表达模式
。
使用
qRT
‑
PCR
技术精确检测苦瓜成熟相关基因的表达模式，需要筛选出在不同苦瓜组织，特别是不同成熟阶段果实中都能稳定表达的内参基因作为参照
。
[0004]目前，绝大多数苦瓜的分子生物学研究还在使用传统的内参基因，例如肌动蛋白
‑
7(ACT7)、
甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶
(GAPDH)、18S
核糖体
RNA(18SrRNA)、
肽基
‑
脯氨酰顺反式异构酶
(CYP)
和延伸因子1‑
α
(EF1
α
)
等
。
然而，不断有研究表明，大部分传统内参基因在不同的植物物种
、
不同的组织器官
、
实验条件和发育阶段中表达并不稳定
。
这些传统内参基因是否可以用来精确量化苦瓜果实成熟相关基因的表达水平还不得而知
。
最近对苦瓜内参基因的一项研究也仅使用了幼苗的叶组织，并不全面
。
[0005]迄今为止，在不同苦瓜组织中
、
特别是在不同成熟阶段的果实中使用系统验证的内参基因还未见报道
。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的在于提供一种苦瓜不同组织和不同成熟期果实的内参基因
、
检测引物及其应用，所述内参基因在苦瓜不同组织和不同成熟期果实中均能稳定表达
。
[0007]实现上述专利技术目的的技术方案包括如下
。
[0008]本专利技术的第一方面，提供了一种苦瓜不同组织和不同成熟期果实的内参基因，其特征在于，所述内参基因为
McHMG1/2,
所述
McHMG1/2
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。
[0009]本专利技术的第二方面，提供了一种检测苦瓜不同组织和不同成熟期果实的内参基因的特异性引物，所述特异性引物包括如
SEQ ID NO.2
所示的正向引物
、
以及如
SEQ ID NO.3
所示的反向引物
。
[0010]本专利技术的第三方面，提供了一种上述内参基因
、
或特异性引物在苦瓜不同组织和不同成熟期果实相关基因的相对表达量分析中的应用
。
[0011]本专利技术的第四方面，提供了一种含有上述特异性引物的检测试剂或试剂盒
[0012]本专利技术的第五方面，提供了一种苦瓜不同组织和不同成熟期果实相关基因的实时荧光定量
PCR
检测方法，所述实时荧光定量
PCR
检测方法中使用
McHMG1/2
基因作为内参基因，所述
McHMG1/2
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。
[0013]本专利技术的专利技术人根据大量的数据分析及经验积累，经过严格的内参筛选程序，首次从众多候选新内参基因中筛选出苦瓜不同组织和不同成熟阶段果实中均表达最稳定的内参基因
McHMG1/2
，可适用于不同组织和成熟阶段苦瓜果实中果实成熟相关基因或其他功能基因的表达分析，显著提高所得数据的稳定性
、
可靠性和准确性，为功能基因表达的精确定量提供有力支持
。
附图说明
[0014]图1为本专利技术实施例1中用于
RNA
‑
Seq
的不同组织或器官以及不同成熟阶段的苦瓜示意图；其中，
A
为根；
B
为叶；
C
为雄花；
D
为雌花；
E
为茎；
F
为绿熟期的苦瓜果实；
G
为破色期的苦瓜果实；
H
为半黄期的苦瓜果实；
I
为全黄期的苦瓜果实；
B
～
E
中比例尺为1厘米；
A、F
～
I
中比例尺为5厘米
。
[0015]图2为本专利技术实施例2中对
qRT
‑
PCR
扩增引物的特异性分析
。
[0016]图3为本专利技术实施例2中已建立的5个内参基因
(ERG)
和
11
个候选新内参基因
(NRG)
的表达水平热图
(A)
和表达水平范围
(B)
；其中，红色表示高转录水平，蓝色表示低转录水平；
R
，根；
S
，茎；
Fm
，雄花；
ff
，雌花；
L
，叶；
Pg
，绿熟期果肉；
Pb
，破色期果肉；
Pt
，半黄期果肉；
Py
，全黄期果肉
。
[0017]图4为本专利技术实施例2中已建立的5个内参基因和
11
个候选新内参基因的表达稳定性分析；其中，
A
～
E
分别为基于
geNorm、BestKeeper、
Δ
C
t
方法
、NormFinder
和
RefFinder
的
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种苦瓜不同组织和不同成熟期果实的内参基因，其特征在于，所述内参基因为
McHMG1/2,
所述
McHMG1/2
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。2.
一种检测苦瓜不同组织和不同成熟期果实的内参基因的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物包括如
SEQ ID NO.2
所示的正向引物
、
以及如
SEQ ID NO.3
所示的反向引物
。3.
权利要求1所述的内参基因
、
或权利要求2所述的特异性引物在苦瓜不同组织和不同成熟期果实相关基因的相对表达量分析中的应用
。4.
含有权利要求2所述的特异性引物的检测试剂或试剂盒
。5.
权利要求4所述的检测试剂或试剂盒在苦瓜不同组织和不同成熟期果实相关基因的相对表达量分析中的应用
。6.
根据权利要求3或5所述的应用，其特征在于，所述基因相对表达量分析的方法为实时荧光定量
PCR
法
。7.
一种苦瓜不同组织和不同成熟期果实相关基因的实时荧光定量
PCR
检测方法，其特征在于，所述实时荧光定量
PCR
检测方法中使用
McHMG1/2
基因作为内参基因，所述
McHMG1/2
...

【专利技术属性】
技术研发人员：McHMG一二，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蔬菜研究所，
类型：发明
国别省市：