核酸扩增用敏化剂制造技术

本发明专利技术提供核酸扩增用敏化剂，其是包含来源于用下述式

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】核酸扩增用敏化剂、核酸扩增用组合物和检查试剂盒


[0001]本专利技术涉及核酸扩增用敏化剂
、
核酸扩增用组合物和检查试剂盒
。

技术介绍

[0002]核酸扩增法是将成为靶标的核酸从几拷贝扩增至几万倍以上的方法，为了基因检查
、
微生物检查
、
病毒检查而在各种各样的领域中被有效利用
。
[0003]核酸扩增法的代表性的方法是聚合酶链式反应
(Polymerase Chain Reaction
，
PCR)
法
。
在典型的
PCR
法中，通过重复以下这三个工序进行核酸的扩增：
(1)
模板
DNA
的变性
(
从双链
DNA
向单链
DNA
解离
)
，
(2)
引物退火至单链模板
DNA
，
(3)
通过
DNA
聚合酶进行引物的延伸
。
在经典的终点
PCR
法中，通过在经历了规定的反应循环的反应终点
(endpoint)
将扩增产物通过荧光性化合物等可视化或者测定溶液的浊度来进行检测
。
[0004]典型的
PCR
法是扩增
DNA
的方法，但也可应用于
RNA
的扩增，将这样的
PCR
法被称为逆转录聚合酶链式反应法
(
以下有时简称为“RT
‑
PCR
法”)。
在
RT
‑
PCR
法中，通过使用逆转录酶的酶反应由
RNA
合成互补
DNA(
以下有时简称为“cDNA”)
，以该
cDNA
为模板进行
PCR
，由此扩增
RNA。
[0005]还已知根据
PCR
法中得到的扩增产物的量来确定初始的核酸的量的方法，将这种
PCR
法称为定量聚合酶链式反应法
(
以下有时简称为“qPCR
法”)。qPCR
法在狭义上是指实时
PCR
法，其为使用荧光
DNA
染色试剂或荧光探针将每个
PCR
循环中扩增的
DNA
量可视化的方法
。
其中，特别是使用荧光探针的方法作为在可特异性地检测目标核酸的扩增这一点上可靠性高的方法而已知
。
[0006]还已知将
RT
‑
PCR
法和
qPCR
法组合的逆转录
‑
定量
PCR
法
(
以下有时简称为“RT
‑
qPCR
法”)。RT
‑
qPCR
法可进一步被分为：在不同的容器中进行
cDNA
合成和
qPCR
法的两步法；将它们在同一容器内作为一系列的反应来进行的一步法
。
其中，在操作的简便性
、
来自系统外的污染物少
、
作为测定对象的核酸的检测灵敏度
(
以下有时简称为“灵敏度”)
高的方面，一步法为优异的
。
[0007]进一步地，近年来还开发了数字
PCR
法
(
以下有时简称为“dPCR
法”)
这种方法，其应用微流路形成技术等，将反应液分配到几十～几万个极小的区域中，一起进行
PCR
，从有扩增的区域的比例利用统计模型确定初始的核酸浓度
。dPCR
法是终点
PCR
法的发展形式
。
[0008]除了如上所述的确定靶标核酸的有无和
/
或量的目的以外，
PCR
法还用于确定靶标核酸的核苷酸序列的目的
(
测序
)。
在测序
PCR
法中，存在以
Sanger
法为代表的各种方法，但均以终点
PCR
法为基本原理
。
[0009]在此，在利用核酸扩增法时，在定性
、
定量和确定序列的任一项中，其灵敏度经常成为问题
。
因此，对促进
PCR
的技术进行了各种研究
。
[0010]例如，广泛进行了通过向
PCR
法的反应液中添加盐
(
例如氯化钾
、
硫酸铵等
)、
甜菜碱
、
多元醇等来提高灵敏度
。
然而，通过添加这些成分来提高灵敏度是有限度的，寻求在更高的水平上提高灵敏度
。
[0011]例如，已知有添加单链
DNA
结合蛋白
(SSB)
以使双链
DNA
不稳定化的方法
。
另外，在专利文献1中，作为用于促进
DNA
的伸长反应的通用性高的
DNA
复制促进因子
(
添加剂
)
，公开了突变型
PCNA(
增殖核抗原
)
单体
。
然而，由这些蛋白构成的添加剂存在难以大量生产
、
保存稳定性存在问题
、
制造成本高这种课题
。
[0012]现有技术文献
[0013]专利文献
[0014]专利文献1：国际公开第
2007/004654
号
。

技术实现思路

[0015]专利技术所要解决的课题
[0016]本专利技术的目的在于提供与由蛋白构成的添加剂相比量产性和保存稳定性优异的核酸扩增用敏化剂
。
[0017]用于解决课题的手段
[0018]本专利技术人反复进行了深入研究，结果发现了包含来源于用下述式
(1)
表示的单体的结构单元的聚合物可适合用作核酸扩增用敏化剂：
[0019][
化学式
1][0020][0021]基于该见解的本专利技术如下所示
。
[0022][1]核酸扩增用敏化剂，其是包含来源于用以下式
(1)
表示的单体的结构单元的聚合物：
[0023][
化学式
2][0024][0025](
式中，
[0026]X1表示
(
甲基
)
丙烯酰氧基或
(
甲基
)
丙烯酰氨基，
[0027]L1表示可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
核酸扩增用敏化剂，其是包含来源于用以下式
(1)
表示的单体的结构单元的聚合物：
[
化学式
1]
式中，
X1表示
(
甲基
)
丙烯酰氧基或
(
甲基
)
丙烯酰氨基，
L1表示可具有1个羟基的碳原子数为2～4的亚烷基或者碳原子数为2～4的亚烷基氧基亚烷基，以及
R1～
R3各自独立地表示碳原子数为1～3的烷基
。2.
根据权利要求1所述的核酸扩增用敏化剂，其是由来源于用上述式
(1)
表示的单体的1种结构单元构成的均聚物
。3.
根据权利要求1所述的核酸扩增用敏化剂，其是进一步包含来源于用以下式
(2)
表示的单体的结构单元的共聚物：
[
化学式
2]
式中，
R4表示氢原子或甲基，以及
R5表示氢原子或碳原子数为1～
20
的烷基
。4.
根据权利要求3所述的核酸扩增用...

【专利技术属性】
技术研发人员：铃木裕贵，近藤圣奈，松田将，
申请(专利权)人：日油株式会社，
类型：发明
国别省市：