一种耐热制造技术

本发明专利技术公开了一种耐热

【技术实现步骤摘要】
一种耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用


[0001]本专利技术属于基因工程及酶工程
，具体涉及到一种耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用
。

技术介绍

[0002]α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶
(
α
‑
L
‑
rhamnosidase
，
EC 3.2.1.40)
是一种能够特异性地水解多种糖苷键型的外切糖苷水解酶，能够水解许多天然的植物提取成分，如橘皮苷
、
柚皮苷
、
朝霍定
C、
淫羊藿苷等糖苷类物质，其主要的功能和作用包括脱苦
、
增香
、
生物转化等，从而提高天然活性物质的生物利用度，可用于食品
、
医药等领域
。
[0003]淫羊藿为小檗科淫羊藿属的多年生草本植物，其多组分黄酮类化合物如淫羊藿苷
、
朝霍定
C、
朝霍定
A、
朝霍定
B
具有多种活性功能
。
淫羊藿次苷
I
，为淫羊藿的天然化学成分，其具有促进人体细胞产生
γ
‑
干扰素，能够显著提高人体的免疫力，并且在防治肺结核
、
流感
、
乙肝等感染性疾病，以及肿瘤的免疫治疗方面具有重要的应用前景
。
此外，淫羊藿次苷
I
属于传统中药的有效成分，毒副作用小，使用安全
。
与淫羊藿次苷
I
的结构相比，淫羊藿苷在
R2
位上多一个鼠李糖，且是通过
α
‑1‑
糖苷键连接的鼠李糖
。
如果能将淫羊藿苷的
R2
位上通过
α
‑1‑
糖苷键连接的鼠李糖特异性切除，就可以将淫羊藿苷转化成淫羊藿次苷
I。
由此可见，筛选获得能特异性降解鼠李糖连接的
α
‑1‑
糖苷键，对生物催化朝淫羊藿苷及其它含有通过
α
‑1‑
糖苷键连接的鼠李糖的天然产物具有重要意义
。

技术实现思路

[0004]本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例
。
在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分
、
说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围
。
[0005]鉴于上述和
/
或现有技术中存在的问题，提出了本专利技术
。
[0006]本专利技术的其中一个目的是提供一种耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶，从
Dictyoglomus thermophilum DSM 3960
基因组中克隆得到的
GH72
家族耐热的
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶
DthRha
，与现有技术相比具有优良的耐热性能，在
95℃、pH6.5
的条件下酶活性最高，在
80℃
下保温
2h
酶活基本保持不变
。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶，编码所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示；所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶在
95℃、pH6.5
的条件下酶活性最高
。
[0008]本专利技术的另一个目的是提供如上所述的耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶的耐糖突变体，所述耐糖突变体是将所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶氨基酸序列的第
479
位的谷氨酸替换为丝氨酸
、
组氨酸
、
精氨酸中的一种获得
。
[0009]本专利技术的另一个目的是提供编码如上所述的耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶或如上所述的耐糖突变体的基因
。
[0010]作为本专利技术编码如上所述的耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶或如上所述的耐糖突变体的基因的一种优选方案，其中：所述耐糖突变体是将所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶氨基酸序列的第
479
位的谷氨酸替换为丝氨酸获得，其核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示；
[0011]或，所述耐糖突变体是将所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶氨基酸序列的第
479
位的谷氨酸替换为组氨酸获得，其核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示；
[0012]或，所述耐糖突变体是将所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶氨基酸序列的第
479
位的谷氨酸替换为精氨酸获得，其核苷酸序列如
SEQ ID NO.5
所示
。
[0013]本专利技术的另一个目的是提供一种重组质粒，所述重组质粒包含如上所述的基因序列
。
[0014]本专利技术的另一个目的是提供一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如上所述的重组质粒
。
[0015]作为本专利技术宿主细胞的一种优选方案，其中：所述宿主细胞包括大肠杆菌
、
枯草芽孢杆菌
、
谷氨酸棒杆菌
、
毕赤酵母
、
酿酒酵母
、
乳酸菌中的一种
。
[0016]本专利技术的另一个目的是提供一种表达如上所述的耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶或如上所述的耐糖突变体的重组大肠杆菌
。
[0017]本专利技术的另一个目的是提供如上所述的耐糖突变体在转化淫羊藿苷中的应用
。
[0018]作为本专利技术耐糖突变体在转化淫羊藿苷中的应用的一种优选方案，其中：以淫羊藿苷为底物，目标产物为淫羊藿次苷
I
；
[0019]其中，底物与耐糖突变体的添加比例为每克底物添加耐糖突变体
0.2
～
5U...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶的耐糖突变体，其特征在于：所述耐糖突变体是将耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶氨基酸序列的第
479
位的谷氨酸替换为丝氨酸
、
组氨酸
、
精氨酸中的一种获得；其中，所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。2.
编码如权利要求2所述的耐糖突变体的基因
。3.
如权利要求2所述的基因，其特征在于：所述耐糖突变体是将所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶氨基酸序列的第
479
位的谷氨酸替换为丝氨酸获得，其核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示；或，所述耐糖突变体是将所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶氨基酸序列的第
479
位的谷氨酸替换为组氨酸获得，其核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示；或，所述耐糖突变体是将所述耐热
α
‑
L
‑
鼠李糖苷酶氨基酸序列的第
479
位的谷氨酸替换为精氨酸获得，其核苷酸序列如
SEQ ID NO.5
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵林果，李琦，张珊珊，张洋洋，王振中，王小宇，刘栋，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：