一种间充质干细胞来源的超微粒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种间充质干细胞来源的超微粒及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞来源的超微粒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种间充质干细胞来源的超微粒
(supermere)
及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]间充质干细胞
(mesenchymal stem cells,MSC)
的临床应用已经在许多国家进行了研究
。MSC
来源丰富，在人体骨髓
、
脂肪
、
肌肉
、
骨骼
、
羊水
、
脐带等多个组织器官中均有发现
。
人脐带来源的间质干细胞
(human umbilical cord mesenchymal stem cells
，
hucMSC)
是存在于新生儿脐带组织中的一种多功能分化干细胞，具有免疫调节
、
组织修复
、
造血功能恢复和诱导分化等功能
。
由于获取方便且无伦理学争议，于是成为医学干细胞研究的首选
。
[0003]由于干细胞体积较大容易积聚引起输注问题出现栓塞
、
干细胞携带的抗原引起较高的免疫反应
、
储存运输条件高等不足，导致目前干细胞治疗虽有成效，但未能完全治疗疾病
。
近年来，研究者们将目光投向干细胞的旁分泌机制上，并从中发现和分离出了多种可溶性因子和
sEV
等物质，并在疾病的在治疗中也取得了较好的效果
。
申请人在
hucMSC
上清中发现并分离了一种与
sEV
和可溶性因子不同的超微粒，该超微粒及其治疗糖尿病视网膜病变等疾病的内容没有相关的记载和报道
。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种间充质干细胞来源的超微粒及其制备方法和应用，所述超微粒能能有效减轻高糖环境引起的
MIO
‑
M1
凋亡
。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种间充质干细胞来源超微粒的制备方法，包括：将人脐带间充质干细胞培养上清进行差速离心，得到上清液，经浓缩
、
超速离心后，得到的沉淀为所述超微粒；所述差速离心法包括：将人脐带间充质干细胞培养上清依次以
300g、2000g
和
10000g
的速度进行离心；所述差速离心的时间依次为
10min、20min
和
30min。
[0007]优选的，所述浓缩包括：将所述上清液于
2000g
条件下离心
30min
，得到浓缩液
。
[0008]优选的，所述超速离心包括：将所述浓缩液依次以
100000g、167000g
和
367000g
的速度下进行超速离心；所述超速离心的时间依次为
3h、16h
和
16h。
[0009]优选的，所述差速离心
、
浓缩和超速离心的温度为
4℃。
[0010]本专利技术还提供了上述制备方法得到的间充质干细胞来源超微粒
。
[0011]优选的，所述间充质干细胞来源超微粒的粒径为小于
30nm。
[0012]本专利技术还提供了上述间充质干细胞来源超微粒在制备治疗糖尿病视网膜病变药物中的应用
。
[0013]优选的，所述间充质干细胞来源超微粒能有效减轻高糖环境引起的
MIO
‑
M1
凋亡
。
[0014]相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0015]本专利技术所述超微粒通过差速超速离心从脐带间充质干细胞培养上清中分离获得，
具有与
sEV
完全不同的物理表征和蛋白质表达谱，是一种从未报道过的间充质干细胞分泌物
。
实验结果表明，本专利技术制备得到的超微粒可以有效减轻高糖环境引起的
MIO
‑
M1
凋亡，为糖尿病视网膜病变提供新的治疗方案
。
附图说明
[0016]图1为蛋白免疫印迹
(WesternBlot)
实验鉴定
supermere
蛋白表达的结果；
[0017]图2为透射电镜检测
supermere
的形态；
[0018]图3为原子力显微镜检测
supermere
形态；
[0019]图4为蛋白质谱结果检测
supermere
与
sEV
差异蛋白表达的火山图；
[0020]图5为免疫荧光试验下
supermere
对高糖环境下
MIO
‑
M1
凋亡的影响
。
具体实施方式
[0021]本专利技术提供了一种间充质干细胞来源超微粒的制备方法，包括：将人脐带间充质干细胞培养上清进行差速离心，得到上清液，经浓缩
、
超速离心后，得到的沉淀为所述超微粒；所述差速离心法包括：将人脐带间充质干细胞培养上清依次以
300g、2000g
和
10000g
的速度进行离心；所述差速离心的时间依次为
10min、20min
和
30min。
[0022]在所述差速离心过程中，
300g
离心
10min
能弃除死细胞，
2000g
离心
20min
能弃除细胞碎片，
10000g
离心
30min
能弃除细胞器
。
[0023]本专利技术所述浓缩优选包括：将所述上清液于
2000g
条件下离心
30min
，得到浓缩液
。
本专利技术对上清液进行多次离心至体积为
40mL。
[0024]本专利技术所述超速离心优选包括：将所述浓缩液依次以
100000g、167000g
和
367000g
的速度下进行超速离心；所述超速离心的时间依次优选为
3h、16h
和
16h。
[0025]本专利技术所述差速离心
、
浓缩和超速离心的温度为
4℃。
[0026]本专利技术还提供了上述制备方法得到的间充质干细胞来源超微粒
。
[0027]本专利技术所述间充质干细胞来源超微粒的粒径优选小于
30nm。
[0028]本专利技术还提供了上述间充质干细胞来源超微粒在制备治疗糖尿病视网膜病变药物中的应用
。
[0029]本专利技术将超本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种间充质干细胞来源超微粒的制备方法，其特征在于，包括：将人脐带间充质干细胞培养上清进行差速离心，得到上清液，经浓缩
、
超速离心后，得到的沉淀为所述超微粒；所述差速离心法包括：将人脐带间充质干细胞培养上清依次以
300g、2000g
和
10000g
的速度进行离心；所述差速离心的时间依次为
10min、20min
和
30min。2.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩包括：将所述上清液于
2000g
条件下离心
30min
，得到浓缩液
。3.
根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述超速离心包括：将所述浓缩液依次以
100000g、167000g
和
367000g
的速度...

【专利技术属性】
技术研发人员：许文荣，尉一凡，钱晖，朱珺彦，陈深元，陈文雅，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：