一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法技术

一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法，它涉及一种筛选生物破乳菌的方法。它解决了现有生物破乳菌破乳效能低，筛选技术滞后，筛选方法针对性差、操作复杂、时间长、筛选效率低的问题。方法：１．富集培养活性污泥中的目的菌，得菌液；２．菌液分离培养得菌株；３．制备全培养液；４．测定排开油圈的直径，取直径ｄ≥３．０ｃｍ的菌株；５．制备全培养液；６．向Ｏ／Ｗ型乳状液中加全培养液进行破乳，选取排油率≥５０％的菌株，即完成。本发明专利技术将初筛破乳菌时间从大于３个月降低至１个月，筛出率可达到１００％，破乳能力高于５０％的菌株，进一步驯化培养则可得到破乳能力高于８０％的高效菌株，针对性强，操作简单易。？

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种筛选生物破乳菌的方法。
技术介绍
生物破乳剂作为生物制剂的一种，具有破乳效率高、成本低、适应性高、环境友好、可重复使用等优点，具有广泛的研究前景。而高效生物破乳菌的种类与数量直接关系到生物破乳剂的应用范围及破乳效果；目前，已报道的高效生物破乳菌的种数相对较少(生物破乳菌菌种单一 )，且破乳效能低(破乳能力低于50%)，导致此现象的原因主要有，破乳菌菌源地的选取不当；筛选技术滞后，筛选方法针对性不强，手段单一 ；筛菌过程复杂，耗时过长(初筛破乳菌时间大于3个月)，筛选效率低，仅为20% 50%。
技术实现思路
本专利技术目的是为了解决现有生物破乳菌破乳效能低，筛选技术滞后，筛选方法针对性差、操作复杂、时间长、筛选效率低的问题，而提供的。 从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法按以下步骤进行一、向装有150ml液体无机盐培养基的三角瓶中接种活性污泥，在温度为28 3(TC、摇床转数为140r/min的条件下培养7d，得富集菌液，然后转接到新鲜的液体无机盐培养基中，在温度为28 30°C 、摇床转数为140r/min的条件下培养7d，重复转接3次，得菌液；二、采用蓝胶平板培养基或油平板培养基对菌液进行划线分离培养，培养条件为倒置于28 3(TC的生化培养箱中培养48 72h，然后挑取阳性单菌落进行划线纯化培养，直至得到菌落及菌体形态一致的菌株；三、将菌株接种于装有100ml液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为3(TC、摇床转数为140r/min的条件下培养3d，得全培养液；四、将0. 2ml经过油红0染色的煤油滴加到有30ml蒸馏水且直径为10cm的培养皿中，煤油膜铺开稳定后，再向煤油膜表面滴加20 iU全培养液，静止30s后测定排开油圈的直径，选取直径d > 3. Ocm的菌株；五、将步骤四中所得菌株接种于装有100ml液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为3(TC、摇床转数为140r/min的条件下培养3d，得全培养液；六、向装有5mL0/W型乳状液的磨口具塞比色管中加入2mL步骤五中所得全培养液，震荡后静止，在室温下进行破乳，24h后选取排油率^ 50%的菌株，即完成从活性污泥中快速筛选生物破乳菌；其中步骤一中活性污泥按体积比为25%的量接种。 本专利技术针对破乳菌的自身特点，提高富集培养的选择性和针对性，将生物表面活性剂产生菌的筛选方法与破乳试验相结合，建立一套高效、简单、周期短的快速筛选系统，用于曝气池活性污泥中具有破乳能力菌株的有效筛选，可得到多种具有高效破乳能力的菌株，对丰富高效破乳菌的菌种资源以及今后大规模生物破乳剂生产所需工程菌的培育均具有深远的意义；利用具有明确目的性的菌株识别方法替代传统的分离纯化手段，将初筛破乳菌时间从大于3个月降低至1个月，极大縮短了冗长的筛菌周期；并保证活性污泥中破乳菌的筛出率可达到100%，明显提高筛菌效率；同时解决了以往所筛出的目的菌株破乳能力低的问题，此方法更容易获得破乳能力高于50%的菌株，进一步驯化培养则可得到破乳能力高于80%的高效菌株；除此以外，该方法还具有针对性强，方法灵活，操作简单易掌握的优点。具体实施例方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一 本实施方式从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法按以下步骤进行一、向装有150ml液体无机盐培养基的三角瓶中接种活性污泥，在温度为28 3(TC、摇床转数为140r/min的条件下培养7d，得富集菌液，然后转接到新鲜的液体无机盐培养基中，在温度为28 30°C 、摇床转数为140r/min的条件下培养7d，重复转接3次，得菌液；二、采用蓝胶平板培养基或油平板培养基对菌液进行划线分离培养，培养条件为倒置于28 3(TC的生化培养箱中培养48 72h，然后挑取阳性单菌落进行划线纯化培养，直至得到菌落及菌体形态一致的菌株；三、将菌株接种于装有100ml液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为3(TC、摇床转数为140r/min的条件下培养3d，得全培养液；四、将0. 2ml经过油红0染色的煤油滴加到有30ml蒸馏水且直径为10cm的培养皿中，煤油膜铺开稳定后，再向煤油膜表面滴加20 ii 1全培养液，静止30s后测定排开油圈的直径，选取直径d > 3. Ocm的菌株；五、将步骤四中所得菌株接种于装有100ml液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为3(TC、摇床转数为140r/min的条件下培养3d，得全培养液；六、向装有5mL0/W型乳状液的磨口具塞比色管中加入2mL步骤五中所得全培养液，震荡后静止，在室温下进行破乳，24h后选取排油率^ 50%的菌株，即完成从活性污泥中快速筛选生物破乳菌；其中步骤一中活性污泥按体积比为25%的量接种。 本实施方式从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的筛出率可达到100%。 本实施方式步骤二中对菌液进行划线分离培养，用量为一接种环。 本实施方式步骤二中阳性单菌落，采用蓝胶平板培养基则出现篮圈为阳性，未出现的为阴性；采用油平板培养基则有菌落长出为阳性，无生长现象的为阴性。 本实施方式步骤二中挑取阳性单菌落进行划线纯化培养，是将所得的各种阳性单菌落都分别进行划线纯化培养，并继续后面的操作。 本实施方式步骤四中排开油圈的直径d > 3.0cm的菌株具有较高的表面活性，作为所需菌株保存，排油圈的直径d《3. Ocm的菌株被淘汰。 本实施方式步骤六中24h后选取排油率^ 50%的菌株，具有高破乳能力，作为初筛破乳菌，斜面划线置于4t:冰箱内保藏；排油率《50%的菌株淘汰。 本实施方式步骤六中0/W型乳状液的制备利用乳化剪切机将Tween60iater(0. 072%(v/v))和Span60-oil (0. 028%(v/v))以6. 5 : 3. 5比例混合，然后以5000r/min转速搅拌3min，形成稳定时间在200h以上的0/W型乳状液。具体实施方式二 本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一、步骤三和步骤五中液体无机盐培养基的成分均相同，液体无机盐培养基由4. 0g的NH4N03、4. 0g的K2HP04、6. 0g的KH2P04、0. 2g的MgS04 7H20、lml的微量元素溶液、40ml的液体石蜡和lOOOmL的去离子水中组成，所述的微量元素溶液由lOOOmg的CaCl2 2H20、1000mg的FeS04 7H20和1400mg的EDTA溶于lOOOmL的去离子水中组成。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。 本实施方式中液体无机盐培养基pH=6. 5且在12rC下灭菌20min ;液体无机盐培养基具有高效定向选择性，在配置中需要在每种药品全部溶解后再加下一种药品，以防产生沉淀。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中活性污泥来自城市污水处理厂曝气池。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。 本实施方式中任何城市的污水处理厂曝气池里的活性污泥均可筛选得到生物破乳菌。 本实施方式中活性污泥的取样与保存选取曝气池第一、第二廊道作为取样地点；从曝气池第一廊道表面取泡沫样品，装入经曝气池水润洗过的采样器中，再从曝气池第二廊道取活性污泥倒入经曝气池水润洗的采样器中，将两部分样品按本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法，其特征在于从活性污泥中快速筛选生物破乳菌的方法按以下步骤进行：一、向装有１５０ｍｌ液体无机盐培养基的三角瓶中接种活性污泥，在温度为２８～３０℃、摇床转数为１４０ｒ／ｍｉｎ的条件下培养７ｄ，得富集菌液，然后转接到新鲜的液体无机盐培养基中，在温度为２８～３０℃、摇床转数为１４０ｒ／ｍｉｎ的条件下培养７ｄ，重复转接３次，得菌液；二、采用蓝胶平板培养基或油平板培养基对菌液进行划线分离培养，培养条件为倒置于２８～３０℃的生化培养箱中培养４８～７２ｈ，然后挑取阳性单菌落进行划线纯化培养，直至得到菌落及菌体形态一致的菌株；三、将菌株接种于装有１００ｍｌ液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为３０℃、摇床转数为１４０ｒ／ｍｉｎ的条件下培养３ｄ，得全培养液；四、将０．２ｍｌ经过油红Ｏ染色的煤油滴加到有３０ｍｌ蒸馏水且直径为１０ｃｍ的培养皿中，煤油膜铺开稳定后，再向煤油膜表面滴加２０μｌ全培养液，静止３０ｓ后测定排开油圈的直径，选取直径ｄ≥３．０ｃｍ的菌株；五、将步骤四中所得菌株接种于装有１００ｍｌ液体无机盐培养基的三角瓶中，在温度为３０℃、摇床转数为１４０ｒ／ｍｉｎ的条件下培养３ｄ，得全培养液；六、向装有５ｍＬＯ／Ｗ型乳状液的磨口具塞比色管中加入２ｍＬ步骤五中所得全培养液，震荡后静止，在室温下进行破乳，２４ｈ后选取排油率≥５０％的菌株，即完成从活性污泥中快速筛选生物破乳菌；其中步骤一中活性污泥按体积比为２５％的量接种。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马放，李旭，刘畅，杨基先，徐暘，侯宁，王金娜，代阳，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]