Abcg4制造技术

本发明专利技术属于动物基因工程和遗传修饰领域，具体的说，涉及

【技术实现步骤摘要】
Abcg4基因在构建脑动脉粥样硬化伴肺部增大小鼠模型中的应用


[0001]本专利技术属于动物基因工程和遗传修饰领域，具体的说，涉及
Abcg4
基因在构建脑动脉粥样硬化伴肺部增大小鼠模型中的应用
。

技术介绍

[0002]动脉粥样硬化
(Atherosclerosis/Atherosis,AS)
是由于动脉内膜受损导致脂肪和纤维物质积聚在动脉最内层而形成斑块状物质，造成局部组织的坏死和软化，形成类似于米粥样的物质并沉积在内膜表面，因此称作动脉粥样硬化
。
随着时间的推移，动脉粥样硬化斑块的纤维性逐渐变强，并进一步积累钙矿物导致血管管腔狭窄，阻碍血液流动甚至出现局部供血不足或者组织坏死
。
[0003]目前，小鼠是动脉粥样硬化研究中最常用的物种，其与人类的动脉粥样硬化过程的许多关键特征是相似的
。
现有的产生动脉粥样硬化的动物模型常用的方法有高胆固醇
、
高脂肪饲料喂养法，免疫学方法，儿茶酚胺类药物注射法，同型半胱氨酸注射法，幼乳大白鼠法及胆固醇－脂肪乳剂静脉注射法等
。
用基因敲除鼠的方法产生动脉粥样硬化模型的主要有敲除低密度脂蛋白受体
LDL
‑
R
以及敲除载脂蛋白
E(ApoE)
的方法
。
通过敲除
Abcg4
基因构建动脉粥样硬化模型尚未见报道
。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术
>。

技术实现思路

[0005]为填补现有技术的空白，本专利技术提供了
Abcg4
基因在构建脑动脉粥样硬化伴肺部增大小鼠模型中的应用，其特征在于，所述应用具体是通过敲除小鼠体内
Abcg4
基因，获得所述脑动脉粥样硬化伴肺部增大小鼠模型
。
[0006]进一步的，所述所述小鼠为
C57BL/6J
小鼠
。
[0007]更进一步的，所述脑动脉粥样硬化伴肺部增大小鼠模型的构建方法包括如下步骤：
[0008]S1、
以野生型
C57BL/6J
小鼠基因组为模板，以引物对
I
扩增包含
Abcg4
基因第6外显子至部分第7外显子的片段，记作片段
I
；
[0009]所述引物对
I
的核苷酸序列为：
[0010]FI:5
′‑
TGGTGGATGGTGCAGATGAC
‑3′
；
[0011]RI:5
′‑
AAATCGGGGTGGTGCTTAGG3
′
；
[0012]以引物对
II
扩增包含
Abcg4
基因第9‑
14
外显子的片段，记作片段
II
；
[0013]所述引物对
II
的核苷酸序列为：
[0014]FII:5
′‑
AACTGACGAAGAAGCCGGAG3
′
；
[0015]RII
：5′‑
ATCAAAGAAGGACTGCCCCG3
′
；
[0016]S2、
将片段
I
插入到
pCRII
载体的
eGFP
编码区前，获得融合片段
I
，将融合片段
I
插入
到靶向载体
OSDUPDEL
的多克隆位点
A
，将片段
II
插入到同一个靶向载体
OSDUPDEL
的多克隆位点
B
，获得靶向重组载体；
[0017]S3
，上述重组载体经注射胚胎干细胞进行同源重组后，获得
ES
细胞打靶产物，对
ES
细胞打靶产物进行阳性克隆鉴定，筛选出正向敲除的
ES
细胞；
[0018]S4
，将
S3
筛选出的
ES
细胞注射到
C57BL/6J
小鼠囊胚中并植入假孕母鼠体内，获得具有种系传递能力的杂合子代小鼠；
[0019]S5
，将上述杂合子代小鼠与
C57BL/6J
小鼠进行
N
代的回交，产生
Abcg4
基因重要功能部位缺陷鼠种系，杂合子相互交配，生成
Abcg4
基因缺陷型小鼠，即所述脑动脉粥样硬化伴肺部增大小鼠模型
。
[0020]进一步的，所述引物对
II
的核苷酸序列为：
[0021]FI:5
′‑
TGGTGGATGGTGCAGATGAC
‑3′
；
[0022]RI:5
′‑
AAATCGGGGTGGTGCTTAGG3
′
；
[0023]所述引物对
II
的核苷酸序列为：
[0024]FII:5
′‑
AACTGACGAAGAAGCCGGAG3
′
；
[0025]RII
：5′‑
ATCAAAGAAGGACTGCCCCG3
′
。
[0026]更进一步的，
S5
中，
N≥16。
[0027]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0028]1、
本专利技术将基因敲除的小鼠用作脑动脉粥样硬化伴肺部增大的特异动物模型，主要通过减少或完全敲除小鼠的至少一种组织或至少一种细胞类型中的
ATP
结合盒转运蛋白超家族
G
亚族中第4号成员基因
(
简称
Abcg4
基因
)
的方法来制作
。
[0029]2、
现有技术构建的动物模型不能很好地反映脑血管硬化与斑块形成的情况，且建模时间较长，本专利技术的小鼠模型见到斑块形成的时间较短，脑血管病变更加明显，可以将其作为药物筛选平台，筛选可以靶向治疗脑动脉粥样硬化的药物
。
[0030]3、
本专利技术的小鼠模型能够模拟多种疾病特征，不仅脑斑块形成显著，还伴随肺部显著增大增重，意味着巨噬细胞的功能严重受损，相比于高脂肪饲料喂养等方法获得的模型，应用范围更广
。
附图说明
[0031]图1为实施例1构建
Abcg4
基因重要功能域缺失鼠的策略示意图
。
[0032]图2为野生型
C57BL/6J
小鼠和
Abcg4
基因缺陷型小鼠脑组织的
H&E
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Abcg4
基因在构建脑动脉粥样硬化伴肺部增大小鼠模型中的应用，其特征在于，所述应用具体是通过敲除小鼠体内
Abcg4
基因，获得所述脑动脉粥样硬化伴肺部增大小鼠模型
。2.
根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述小鼠为
C57BL/6J
小鼠
。3.
根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述脑动脉粥样硬化伴肺部增大小鼠模型的构建方法包括如下步骤：
S1、
以野生型
C57BL/6J
小鼠基因组为模板，以引物对
I
扩增包含
Abcg4
基因第6外显子至部分第7外显子的片段，记作片段
I
；以引物对
II
扩增包含
Abcg4
基因第9‑
14
外显子的片段，记作片段
II
；
S2、
将片段
I
插入到
pCRII
载体的
eGFP
编码区前，获得融合片段
I
，将融合片段
I
插入到靶向载体
OSDUPDEL
的多克隆位点
A
，将片段
II
插入到同一个靶向载体
OSDUPDEL
的多克隆位点
B
，获得靶向重组载体；
S3
，上述重组载体经注射胚胎干细胞进行同源重组后，获得
ES<...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴金美，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：