灯盏花植物组织培养及植株再生方法技术

本发明专利技术涉及一种灯盏花植物组织培养及植株再生方法，属于涂料植物组培领域

【技术实现步骤摘要】
灯盏花植物组织培养及植株再生方法


[0001]本专利技术属于植物组培
，具体涉及一种灯盏花植物组织培养及植株再生方法
。

技术介绍

[0002]灯盏花别称有灯盏细辛
、
东菊草
、
地顶草
、
双葵花等，为菊科植物短葶飞蓬
Erigeron breviscapus(Vant.)Hand
‑
Mazz
的干燥全草
。
全株中含有成分黄酮类
、
咖啡酸酯类
、
芳香酸类
、
香豆素类
、
吡喃酮类等，其中黄酮类化合物野黄芩苷
(
又名灯盏花乙素
)
及咖啡酸酯类为其主要有效成分
。
灯盏花具有非常广泛的药理活性，目前灯盏花临床用药上，除了治疗心脑血管系统疾病以外，在糖尿病
、
肾组织受损
、
头晕目眩
、
老年性疾病等的治疗上也有很好的作用
。
[0003]灯盏花是一种多年生草本植物，大部分生长在中国的西南部地区，栽培面积主要以云南居多
。
[0004]灯盏花整株高约
20
‑
30cm
左右
。
根状茎木质，根纤维状，颈部被残叶基
。
叶片集中在植株的底部呈莲座状生长；茎杆生有叶片2‑4叶，且叶片无柄，圆披针形或狭叶披针形，茎秆上叶呈线形
。
花序头状，总苞绿色
。
舌状外围的雌花，花开展后为上中下3层，颜色为蓝或粉紫色，有光泽的花筒顶部全缘；中心为管状两性花，呈黄色，花基部窄呈漏斗状，花药长于花冠；瘦果狭长
0.1
‑
0.2cm
，呈压扁状
。
花期通常为4‑
10
月
。
[0005]灯盏花在海拔
1500
‑
2400m
的山坡
、
草地或林缘生长普遍
。
灯盏花从野生生长到人工栽培的时间不长，所以它对环境的适应及抗逆性都比较强，适宜温度在
15
‑
25℃
之间，相对湿度
60
％
‑
75
％，年雨量
650
‑
1200mm
，长日照对灯盏花的品质会有所提升
。
营养生长前期施加氮肥有利于营养器官的生长，抽薹开花后期施加磷肥有利于籽粒饱满
。
[0006]灯盏花中含有的化学成分主要有黄酮类化合物，其中又以灯盏乙素最具代表性
。
目前，从灯盏花中分离出的黄酮及黄酮苷类成分已有
20
余个；灯盏花中还含有许多的咖啡酸酯类化合物，其中包括咖啡酸酯类化合物的同分异构体，迄今为止从灯盏花植株中共分离得到
40
余种咖啡酸酯类物质；还含有许多的挥发油成分，其中以长链状脂肪酸
、
环类
、
长链脂肪烷等居多
。
现今为止，从灯盏花中大概鉴定了出近
80
种挥发油类成分
。
除了黄酮及其苷类
、
咖啡酸酯类
、
挥发油之外，灯盏花中还含有香豆素类
、
植物甾醇
、
五环三萜类
、
氧杂蒽酮等多种成分
。
[0007]灯盏花在现代医药方面具有不可替代的价值，以灯盏花总黄酮
、
灯盏花素
、
灯盏乙素和总咖啡酸酯等酚酸类化合物为基础生产的剂型有片剂
、
软胶囊
、
丸剂
、
注射液
、
滴丸等，药材市场原料需求量非常广泛，需求总量超过
300
万
kg。
灯盏花在心脑血管
、
骨科
、
及皮肤科都占有一定的地位，其中以治疗心脑血管类疾病为主，心脑血管疾病被称为世界上第四大疾病，因此也就迫切的需要大量的灯盏花原料药用来制备中成药，治疗疾病，所以灯盏花的市场需求量相比往年只会不断增加
。
[0008]灯盏花的主要药用价值有解表散寒，祛风除湿，疏经活血，消积止痛等，主治心脑
血管类疾病及其导致的瘫痪
、
脑后遗症等
。
但因为对野生灯盏花的盲目采集
、
以及引种栽培困难
、
品种退化等，使得药用灯盏花野生资源在不断减少，依靠采挖野生灯盏花的方式已经不能够满足人类临床需求和社会发展需要了，为了解决野生灯盏花无法提供需求这类问题，只有通过人工种植的方法来满足这类需求
。
[0009]随着药用植物生物技术的迅速发展，特别是对植物细胞全能性的广泛认识，越来越多的人希望利用植物组织培养技术进行药用灯盏花无性系的快速繁殖和离体育苗，尤其是直接生产一些药用成分，以满足社会需求，为人类健康服务
。
[0010]在灯盏花植物组培方面，大量文献表明，前研究人员用灯盏花花药培养诱导愈伤，以灯盏花幼叶诱导愈伤
、
继代和生根等探究，就不同激素及其不同浓度对灯盏花愈伤诱导的影响进行了更深层次的研究，以初步建立系统的灯盏花植物组织培养体系
。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种灯盏花植物组织培养及植株再生方法
。
[0012]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0013]一种灯盏花植物组织培养及植株再生方法，包括如下步骤：
[0014]步骤
(1)
，外植体的处理：取灯盏花幼嫩且叶缘完整无病害叶片，清洗并灭菌，然后将其切成小块；
[0015]步骤
(2)
，愈伤组织诱导培养：
[0016]将步骤
(1)
得到的叶片小块接种至愈伤组织诱导培养基中，于
25℃
条件下进行培养，待愈伤组织膨大变绿，得到愈伤组织；
[0017]所述的愈伤组织诱导培养基为：
1/2MS
基础培养基
+
蔗糖
15g/L+
琼脂
7.5g/L+2,4
‑
D 0.7mg/L+IAA 0.5mg/L+
浓缩硅
0.8ml/L
；
[0018]步骤
(3)
，不定芽诱导培养：
[0019]将步骤
(2)
得到的愈伤组织切成小块后，接种至愈伤组织诱导培养基中进行继代培养，然后将继代培养得到的愈伤组织接种至不定芽诱导培养基中，于
25℃
条件下进行培养，待芽生长健壮至2‑
3cm
，得到灯盏花本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种灯盏花植物组织培养及植株再生方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），外植体的处理：取灯盏花幼嫩且叶缘完整无病害叶片，清洗并灭菌，然后将其切成小块；步骤（2），愈伤组织诱导培养：将步骤（1）得到的叶片小块接种至愈伤组织诱导培养基中，于
25℃
条件下进行培养，待愈伤组织膨大变绿，得到愈伤组织；所述的愈伤组织诱导培养基为：
1/2MS
基础培养基
+
蔗糖
15g/L+
琼脂
7.5g/L+2,4
‑
D 0.7mg/L+IAA 0.5mg/L+
浓缩硅
0.8ml/L
；步骤（3），不定芽诱导培养：将步骤（2）得到的愈伤组织切成小块后，接种至愈伤组织诱导培养基中进行继代培养，然后将继代培养得到的愈伤组织接种至不定芽诱导培养基中，于
25℃
条件下进行培养，待芽生长健壮至2‑
3cm
，得到灯盏花不定芽；所述的不定芽诱导培养基为：
1/2MS
基础培养基
+
蔗糖
15g/L+
琼脂
7.5g/L+
活性炭
0.5g/L+6
‑
BA 0.8mg/L+NAA 1mg/L+
浓缩硅
1.5ml/L
；步骤（4），不定根诱导培养：将步骤（3）得到的灯盏花不定芽至不定根诱导培养基中，于
25℃
条件下进行培养，待根生长至2‑
3cm
，得到生根苗；所述的不定根诱导培养基为
1/2MS
基础培养基
+
蔗糖
15g/L+
琼脂
7.5g/L+
活性炭
0.5g/L+6
‑
BA 0.2mg/L+KT 1.5mg/L+
浓缩硅
1.5ml/L
；步骤（5），炼苗移栽：将生根苗置于温室炼苗
3d
，取出生根苗清洗并消毒，将消毒后的生根苗假植到3‑
5cm
厚的有机质土的苗盘中，在其上边覆盖一层塑料薄膜，并保持土面高水分，8‑
10d
后揭开塑料薄膜，每3天浇水一次，并使用质量浓度为
0.1%
的农用复合肥水溶液每
7d
浇灌一次，揭膜后
20d
即可成苗定植于大田
。2.
根据权利要求1所述的灯盏花植物组织培养及植株再生方法，其特征在于，步骤（1）中，清洗的方法为：用洗涤剂搓洗叶面，自来水冲洗<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张广辉，冯垒，杨生超，马春花，赵艳，刘祥宇，付瀚钰，吴博霖，谭凤灵，段美玉，贺雪颖，张双艳，寸竹，谢业翠，查明思，李霞，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：