【技术实现步骤摘要】
一种海藻酸盐/聚乙烯亚胺复合修饰磁性纳米探针及其制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及生物医药
,特别是涉及一种海藻酸盐
/
聚乙烯亚胺复合修饰磁性纳米探针及其制备方法和应用
。
技术介绍
[0002]肺癌是全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一
。
局部复发和远处转移是导致肺癌高病死率的主要原因
。
此外,肿瘤的异质性是单次活检无法获取肿瘤全部分子信息的重要原因,也是造成肿瘤耐药性的基础,因此需要对肿瘤的分子分型进行动态评估
。
建立针对肺癌早期诊断和监测的检验新技术对改善患者的整体预后尤为重要
。
[0003]液体活检作为肿瘤的无创诊断技术,近几年发展迅速
。
循环肿瘤细胞
(CTCs)
被定义为那些自发或受外界因素作用由癌症原发灶或转移灶脱离,离开实体肿瘤病变并进入血液的癌细胞
。CTCs
可以提供包含
DNA、RNA
和蛋白质等多层次的分子信息,而其他指标只能提供遗传层面的异常信息,由此反映出
CTCs
在肺癌的诊断
、
疗效评价
、
预后预测等方面的显著贡献
。
[0004]现有的
CTCs
富集方法,通常需要首先对患者血液进行红细胞裂解,这是由于血液中存在着数量巨大的红细胞,会强烈地吸附在富集材料表面,从而影响
CTCs
的富集效率
。r/>此外,患者血液中复杂众多的蛋白质也会与富集材料发生非特异性地吸附,造成
CTCs
富集特异性和准确性降低,进而影响癌症患者的诊断结果
。
纵然科研工作者一直在努力寻找抗蛋白质非特异性吸附材料,并研究其吸附的机理,但到目前为止,未得到的抗非特异性蛋白吸附材料
。
因此,寻找一种低成本
、
易制备
、
高特异性
、
且能够抵抗血液蛋白质和红细胞非特异性的新型磁珠材料,并将该材料与
CTCs
的富集技术相结合,实现全血中
CTCs
的研究,意义重大
。
[0005]检索国内外有关磁性复合纳米材料的文献和专利,结果表明,利用海藻酸盐和聚乙烯亚胺复合修饰磁性纳米探针和层层组装技术,用于肺癌患者全血中循环肿瘤细胞的分选应用的研究尚未见相关报道
。
[0006]为此,我们提供了一种海藻酸盐
/
聚乙烯亚胺复合修饰磁性纳米探针及其制备方法和应用
。
技术实现思路
[0007]为了克服现有技术的不足,本专利技术提供一种海藻酸盐
/
聚乙烯亚胺复合修饰磁性纳米探针及其制备方法和应用,本申请所述的磁性探针,无需裂解红细胞,直接在1毫升患者全血中就可以进行循环肿瘤细胞的分选,并且具有高效的分选效率
。
[0008]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是:
[0009]本专利技术的第一目的,提供一种海藻酸盐
/
聚乙烯亚胺复合修饰磁性纳米探针,包括复合聚合物修饰的磁性材料
、
连接到所述复合聚合物修饰的磁性材料上的适配体;
[0010]所述复合聚合物包括海藻酸和聚乙烯亚胺;
[0011]所述复合聚合物修饰的磁性材料中的磁性材料为
Fe3O4磁性纳米粒子;
[0012]所述适配体包括氨基化修饰的
CSV
适配体和
\
或氨基化修饰的
EpCAM
适配体
。
[0013]优选的,所述复合聚合物修饰的层数为4‑
10
层
。
[0014]优选的,所述
Fe3O4磁性纳米粒子的平均粒径为
230nm
,表面净电荷为
‑
18.56mV。
[0015]更优选的,所述复合聚合物修饰的磁性材料中,
Fe3O4磁性纳米粒子
、
海藻酸
、
聚乙烯亚胺的质量比为
12:1:2。
[0016]本专利技术的第二目的,提供上述探针的制备方法,包括以下步骤:
[0017](1)
制备
Fe3O4分散液
[0018]通过水热法制备
Fe3O4磁性纳米粒子,制备
Fe3O4分散液;
[0019](2)
多层复合聚合物修饰的磁性材料的制备
[0020]向
Fe3O4分散液中交替加入聚乙烯亚胺
、
海藻酸,进行反应;反应结束后,经过洗涤和分离,得到多层复合聚合物修饰的磁性材料;
[0021](3)
活化
[0022]将多层复合聚合物修饰的磁性材料和活化剂进行充分混合,进行表面羧基的活化;
[0023](4)
孵育
[0024]将活化后的多层复合聚合物修饰的磁性材料和适配体进行孵育反应,得到海藻酸盐
/
聚乙烯亚胺复合修饰磁性纳米探针
。
[0025]优选的,在步骤
(2)
中反应的
pH
=4‑5,反应时间为3‑
4h。
[0026]优选的,在步骤
(2)
中使用
0.15mol/L
的
NaCl
溶液进行洗涤
。
[0027]优选的,在步骤
(3)
中所述活化的时间为
0.5
‑
1h。
[0028]优选的,在步骤
(3)
所述活化剂包括1‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基
)
碳酰二亚胺
、N
‑
羟基琥珀酰亚胺
。
[0029]优选的,步骤
(2)
得到的多层复合聚合物修饰的磁性材料平均粒径为
245nm
,表面净电荷为
52mV
;
[0030]优选的,所述步骤
(4)
中多层复合聚合物修饰的磁性材料与
ZY5C
和
SYL3C
孵育的摩尔质量比分别为
2.5
×
105mol/mg
和
2.8
×
105mol/mg。
[0031]本专利技术的第三目的,将上述探针,应用于分选肺癌全血中的循环肿瘤细胞
。
[0032]进一步的,分选肺癌全血中的循环肿瘤细胞,分选步骤包括:
[0033]将上述磁性纳米探针制备成悬浮液后,加入到每毫升含有数量范围为5~
80
个循环肿瘤细胞的
PBS
溶液或者全血中,室温下孵育一定时间后,通过磁性分离,将细胞与磁性本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种海藻酸盐
/
聚乙烯亚胺复合修饰磁性纳米探针,其特征在于,包括复合聚合物修饰的磁性材料
、
连接到所述复合聚合物修饰的磁性材料上的适配体;所述复合聚合物包括海藻酸和聚乙烯亚胺;所述复合聚合物修饰的磁性材料中的磁性材料为
Fe3O4磁性纳米粒子;所述适配体包括氨基化修饰的
CSV
适配体和
\
或氨基化修饰的
EpCAM
适配体
。2.
根据权利要求1所述的探针,其特征在于,所述复合聚合物修饰的层数为4‑
10
层
。3.
根据权利要求1所述的探针,其特征在于,所述
Fe3O4磁性纳米粒子的平均粒径为
230nm。4.
根据权利要求2所述的探针,其特征在于,所述复合聚合物修饰的磁性材料中,
Fe3O4磁性纳米粒子
、
海藻酸
、
聚乙烯亚胺的质量比为
12:1:2。5.
根据权利要求1‑4任一项所述探针的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)
制备
Fe3O4分散液通过水热法制备
Fe3O4磁性纳米粒子,制备
Fe3O4分散液;
(2)
多层复合聚合物修饰的磁性材料的制备向
Fe3O4分散液中交替加入聚乙烯亚胺
、
海藻酸,进行反应;反应结束后,经过洗涤和分离,得到多层复合聚合物修饰...
【专利技术属性】
技术研发人员:周信光,何佳骏,
申请(专利权)人:深圳亿芯医疗科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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