基于绿色荧光蛋白ｓｆＧＦＰ的荧光互补系统技术方案

本发明专利技术公开了基于绿色荧光蛋白ｓｆＧＦＰ的荧光互补系统。该蛋白片段，如１）、２）或３）所示：１）氨基酸序列如ＳＥＱＵＥＮＣＥ?ＩＤ：５所示的蛋白片段；２）氨基酸序列如ＳＥＱＵＥＮＣＥ?ＩＤ：７所示的蛋白片段；３）氨基酸序列如ＳＥＱＵＥＮＣＥ?ＩＤ：９所示的蛋白片段。本发明专利技术基于ｓｕｐｅｒｆｏｌｄｅｒ?ＧＦＰ（ｓｆＧＦＰ）荧光蛋白，从其第２１４和第２１５氨基酸残基分离得到两个荧光蛋白片段（ｓｆＧＦＰＮ?ａｎｄ?ｓｆＧＦＰＣ）；其中ｓｆＧＦＰＣ片段通过点突变的方法改进为假阳性更少的蛋白片段。实验证明，本发明专利技术突变得到的ｓｆＧＦＰＣ片段与ｓｆＧＦＰＮ用于构建检测蛋白质相互作用的荧光互补系统的效果很好，且假阳性率很低，远低于对照组。本发明专利技术构建的ｓｕｐｅｒ?ｆｏｌｄ?ＧＦＰ?ＢｉＦＣ克服了ｓｕｐｅｒ?ｆｏｌｄ?ＧＦＰ本身自激活产生假阳性结果的缺陷。因此，本发明专利技术在检测蛋白质相互作用领域将有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基于绿色荧光蛋白sfGFP的荧光互补系统。
技术介绍
研究蛋白质_蛋白质间的相互作用(PPI)是研究细胞中信号通道和传导的基础。 细胞的平衡态、内部变化和细胞生理功能都很大程度上依赖于蛋白质_蛋白质相互作用的 信号网络进行调节。检测他们之间的相互作用，揭示生物学功能是当代生物医药领域的热点ο通过分子生物学的方法，调节特定的蛋白质与蛋白质相互作用为一些疑难杂症也 提供了一种新的治疗方法的可能性。因此，无论是学术科研机构还是制药公司对这一领域 都表现出浓厚的兴趣，希望将调节蛋白质与蛋白质相互作用作为一种新的治疗手段。 在生物体外有很多种研究蛋白质-蛋白质相互作用的方法。其中大多需要首先将 这些蛋白从其环境中纯化出来才可以使用。但因为只有将所研究的蛋白还原到自然细胞生 理状态下进行研究，我们才能得到准确空间信息，因此能够用于活细胞中PPI的分析技术 显得尤为重要。类似的技术包括荧光共振能量转移技术(FRET)、双分子荧光互补技术(BiFC)、 荧光互相关谱(FCCS)等。在这些方法中，双分子荧光互补技术(BiFC)被证明是较为普遍 的研究蛋白质相互作用的技术，并且广泛用于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白片段，如１）、２）或３）所示：　　１）氨基酸序列如ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＩＤ：５所示的蛋白片段；　　２）氨基酸序列如ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＩＤ：７所示的蛋白片段；　　３）氨基酸序列如ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＩＤ：９所示的蛋白片段。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林坚，夏斌，周军，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]