一种深海河流弧菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物学领域，具体的说是一种深海河流弧菌及其应用

【技术实现步骤摘要】
一种深海河流弧菌及其应用


[0001]本专利技术涉及生物学领域，具体的说是一种深海河流弧菌及其应用
。

技术介绍

[0002]弧菌属是一类革兰氏阴性菌，目前已知由
100
多个种组成
。
该属的成员主要生活在水环境，包括微咸水
、
海水环境等
。
目前已知至少有
12
种弧菌可在不同程度上引起人类疾病，例如胃肠道疾病
、
菌血症和败血症等
。20
世纪
70
年代，首次从孟加拉国的腹泻患者中分离出了河流弧菌
。
现今河流弧菌已成为弧菌属的新兴食源性病原之一，世界各地都报告了由该菌引发的疫情，其通常与卫生条件差和食用受河流弧菌污染的海产品有关
。
河流弧菌感染可导致急性胃肠炎和其他疾病
。
研究表明，河流弧菌对人类上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞具有明显的细胞毒性作用
。
深海中蕴含着数量庞大
、
种类繁多的微生物，具有重要的科研价值和经济价值
。
目前，来自深海的河流弧菌对人类细胞的毒性还未见报道
。

技术实现思路

[0003]本专利技术目的在于提供一种深海河流弧菌及其应用
。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为
[0005]一种河流弧菌，河流弧菌
V13
保存于中国典型培养物保藏中心
CCTCC
>，保藏编号为：
CCTCC M 20231763
，保藏日期
2023.9.22
，分类命名为河流弧菌
(Vibrio fluvialis)。
[0006]所述的河流弧菌
V13
在细胞毒性中的应用
。
[0007]所述河流弧菌
V13
在细胞毒性中溶解血细胞的应用
。
[0008]所述河流弧菌
V13
在诱导人单核细胞死亡中的应用
。
[0009]所述细胞毒性中菌株为将
V13
在
2216E
培养基中于
28℃
培养至
OD
600
0.8。
[0010]进一步的说，将河流弧菌菌株
V13
在
2216E
培养基中培养至
OD
600 0.8。
将细菌与人类单核细胞按照
5:1
比例孵育，通过显微镜形态观察
、
乳酸脱氢酶
(LDH)
释放检测等确定细胞死亡情况
。
[0011]本专利技术具有如下优点：
[0012]1.
本专利技术的深海河流弧菌由冲绳海槽南部
(127
°
04
′
29.587
″
E,27
°
16
′
02.831
″
N
，深度
1587m)
的深海海水样品中分离获得，其可以在简单的
2216E
培养基中生长，保存容易
。
[0013]2.
本专利技术的深海河流弧菌，能够诱导羊血细胞溶血和人单核细胞死亡
。
附图说明
[0014]图1为本专利技术实施例提供的
V13
的形态及运动学特征
。(A)V13
的透射电子显微镜照片
。(B)V13
在含
0.3
％
(
左
)
和
0.5
％
(
右
)
琼脂的
2216E
培养基中的运动情况
。
[0015]图2为本专利技术实施例提供的
V13
的溶血活性效果图
。
其中，在放置于羊血琼脂平板上的无菌滤纸片上分别滴加
V13、Triton X
‑
100(
阳性对照
)
和
PBS(
阴性对照
)
，
28℃
孵育
24h
后观察
。
[0016]图3为本专利技术实施例提供的
V13
引起细胞死亡效果图
。(A)V13
处理不同时间点后的细胞
。
箭头所指是处于死亡阶段的代表性细胞，标尺为
10
μ
m。(B)
对应图
A
各个时间点细胞
LDH
的释放量
(
指征细胞死亡
)
，实验数据为三次平行实验结果
。
具体实施方式
[0017]下面结合实施例对本专利技术作进一步说明
。
实施例旨在对本专利技术进行举例描述，而非以任何形式对本专利技术进行限制
。
[0018]实施例1[0019]河流弧菌
V13
的获得：
[0020]1.
菌株的分离
[0021]将“科学号”科考船在冲绳海槽南部采集的海水样品在无菌条件下，稀释并涂布于
2216E
固体培养基上，在
28℃
下培养1‑2天
。
挑取生长的单菌落到
2216E
液体培养基，
180rpm
，
28℃
条件下过夜活化，之后在
2216E
琼脂平板上三区划线，待菌落生长后挑取单菌落进行活化
(
同上
)。
将活化至
OD
600
＝
0.8
‑1的细菌，以
1:1
的比例加入到
30
％甘油中，并置于
‑
80℃
长期保存
。
[0022]2.
菌株的鉴定
[0023]2.1、
菌株的形态学鉴定
[0024]将上述分离获得
V13
在
2216E
培养基
(
购自“海博生物”公司，青岛
)
中于
28℃
培养至
OD
600 0.8
，慢速离心
(2000g,3min)
收集菌体，用超纯水清洗1遍去除培养基，再用超纯水重悬菌体，混匀
。
用
2.5
％
(w/v)
戊二醛固定1‑
2h
，
PBS
清洗3次
(8,000g,3min)。
用1％
(w/v)
磷钨酸负染
30min
，吸净染液后
PBS
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种河流弧菌，其特征在于：河流弧菌
V13
保存于中国典型培养物保藏中心
CCTCC
，保藏编号为：
CCTCC M 20231763
，保藏日期
2023.9.22
，分类命名为河流弧菌
(Vibrio fluvialis)。2.
按权利要求1所述的河流弧菌
V13
在细胞毒性中的应用
。3.
按权利要求2所述的河流弧菌
V13
的应用，其特征在于：所述河流弧菌

【专利技术属性】
技术研发人员：孙黎，罗晶昶，管晓璐，原子皓，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：