病毒体的冷冻干燥制造技术

本发明专利技术涉及用于病毒体的高效冷冻干燥和重建的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于病毒体的高效冷冻干燥和重建的组合物和方法。
技术介绍
冷冻干燥或"冻干"是用于去除水分的技术方法。其中，含水溶 液在其共晶点以下被冷却，直至其完全被冷冻。之后，将大气压力降 至真空，使得水升华并从溶液中脱出。被溶解的因子保持为多孔固体， 之后其可再次溶于水。冻干产生具有巨大表面积的固体，导致高的水 溶性。冷冻干燥在制药学应用中得到广泛使用，因为绝大多数医药品在 溶液中具有有限的储存期。通过冻干剂的生产可显著提高其储存期， 所述冻干剂在使用前在适当的溶剂中快速溶解。尽管已证明冷冻干燥 是当前普遍使用的优良的保藏技术，但是其也具有本质的缺点。这些 缺点主要与冷冻和重建过程相关联，其经常对生物活性因子或组合物 有害。为保持功能性和活性，发展了不同的技术，特别是包括例如糖 如蔗糖和海藻糖的防冻剂的使用。脂质体和病毒体作为药物递送载体具有突出的特点。但是脂质体是球形脂质嚢，病毒体是不含有原始病毒感染遗传物质的病毒包膜。 脂质体和病毒体的区别在于病毒体在其表面含有使其成为融合活性 颗粒的额外蛋白，而脂质体是非活性载体。因此，病毒体是现代疫苗接种中高度有效的佐剂/载体系统，具有 作为抗原递送载体的优良特性和强大的免疫原性潜能，同时伴随着最 小化的副作用危险。当前，病毒体已被有效应用于许多疫苗。例如，可商业化获得的 抗甲肝病毒和流感病毒疫苗使用病毒体作为佐剂和安全的抗原递送 载体。由接种重建在病毒体内的抗原所引发的抗体显示出对其赖 发的抗原的高亲合性。脂质体的冻干可以防止储存期间磷脂的水解和嚢泡的物理降解。 另外，其可帮助稳定整合在脂质体中的物质。脂质体制剂的冻干形成 干块，其可在数分钟内重建以获得最初的分散体，即，如果使用合适 的赋形剂，以及如果应用合适的冻千条件。另一方面，冻干方法本身 可以引起脂质体的物理变化，例如被灌嚢因子的丟失及嚢泡大小的改 变。这种损伤的出现并不惊奇，因为亲水的磷脂头部基团和水分子之 间的相互作用在脂质体双层形成中扮演关键的角色。因此，通过冻干 从脂质体中去除水是令人激动的挑战。另外，冻干是耗时和耗能的方 法，其确实需要一些专门技术以防止具体的缺陷。有幸的是，赋形剂， 例如双糖，在冷冻(冷冻干燥)过程中保护脂质体已得到确定，并且冻干技术在文献中已得到广泛描述(Pikal等人.，1990， Int. J. Pharm. Sci. (国际制药科学杂志)60,203;Pikal， 1990,Biopharm(生物制药)10, 18; Essig等人.，1993， "Lyophilization (冷冻干燥)"，Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft, Stuttgart ; Jenning, 1999， "Lyophilization: Introduction and basic principles (〗令冻、干燥入门及基本原、J里)", Interpharm Press (国际制药学出版社)，Englewood， CO )。冷冻干燥保护剂通过以下保护脂质体(1)阻止脂质体的融合， (2)阻止冰晶对双分子层的破坏，以及(3)在无水时保持双分子层 的完整性。为此，冷冻干燥保护剂必须在脂质体内和周围形成无定形 的玻璃状基质。冷冻千燥保护剂和磷脂头部基团之间的相互作用被认 为对阻止脂质体在重水合过程中的漏出特别重要，所述脂质体具有在 室温下呈水合状态的液-晶双分子层。可以鉴别出有关冷冻的不同类型的脂质体制剂(1)空脂质体， 用要被灌嚢的化合物的溶液重建该脂质体，(2)承载与双分子层有力 相联的化合物的脂质体，以及(3)含有不与双层相互作用的水溶性 化合物的脂质体。第三种代表了最大的挑战，因为需要既阻止被灌嚢 溶质的漏出又保持脂质体大小。当确定脂质体对冻干压力的抗力时， 双分子层的组分是极为重要的因素，但是目前难于从文献中总结出一 般原则，因为涉及了许多的其它参数，包括冷冻干燥方法的条件，冷冻干燥保护剂的选择，和嚢泡的大小。如上文所描述，已证实脂质体的冷冻干燥至多是条件苛刻，但是 病毒体的冷冻干燥面对更大的问题。与脂质体相比，是由于包膜内承 担病毒体融合活性的额外的蛋白。因为蛋白对冻干带来的引起活性显 著丟失的压力极为易感。因此，存在着对克服与融合活性分子即病毒体的高效冷冻千燥及 重建相关的问题的组合物和方法的需求。
技术实现思路
本专利技术提供了用于制备高度冷冻干燥压力抗性的、可水合的病毒 体冷冻干燥制剂的生物活性组合物和方法，及其重建的方法。根据本 专利技术，生物活性组合物是指含有病毒体和用于高效冷冻干燥和重建病 毒体的阳离子脂质的免疫原性组合物或药物组合物，并且特别是指免 疫原性组合物或药物组合物，其中用于高效冷冻干燥和重建病毒体的 阳离子脂质存在于病毒体的膜中。使用本专利技术的教导，可以获得具有突出冷冻干燥和重建特性并且特别有助于递送抗原、药物和包括DNA、 RNA、 siRNA在内的其它 药物活性物质进入细胞的病毒体。冷冻干燥后，其仍可以通过靶向系 统递送所述物质到特定的细胞，其识别特定细胞类型的表面标记，并 且因此特别优越于其它已知的递送系统。在一优选实施方案中，使用的阳离子脂质体为阳离子胆固醇书亍生物。在本专利技术的另 一实施方案中，所述胆固醇衍生物由以下通式表示(I)其中R选自R'; R'- (OO)-; R'-O- (OO)-; R'画NH- (OO) -; R'画O-(C=0) -R"- (C=0) -; R'- NH-(C=0)-R"-(C=0)-，其中R'为被至少一个阳性荷电基团取代的d-CV烷基，优选地是 通式1^112113:^+-的含1^基团，并且各自的反离子是x-;其中Ri， R2和R3相互独立地选自氢和d-CV烷基；其中x-选自卣素、硫酸氢根、磺酸根、磷酸二氩根、醋酸根、三 卤醋酸根和碳酸氢根；以及其中R"是d-CV亚烃基。根据本专利技术，为d-CV亚烃基的R"代表饱和的CrQ-亚烃基部分， 其可为-CH2-， -(CH2)2-等，也可以代表支链例如-CH(CH3)-(CH2)2-等。在一个进一步的实施方案中，所述胆固醇衍生物由通式n表示(I工)其中，RhR2和R3可相互独立地选自氬和d-CV烷基，并且其中X—是鹵素阴离子。在另一个实施方案中，所述阳离子脂质由通式II表示，其中R4和R2是甲基，R3是氢，并且X-是卣素阴离子，优选地是氯离子，即 3 (3 胆固醇氯化物(DC-Chol )。在 另一个最优选的实施方案中，所述阳离子脂质由式II表示，R4、 R2 和R3是甲基，并且X-是卣素阴离子，优选地是氯离子，即3(3胆固醇氯化物(TC-Chol)。本专利技术的病毒体是向细胞递送生物活性物质的融合活性载体，所 述生物活性物质选自药物因子和细胞的抗原分子。特别是，本专利技术的 病毒体是抗原递送载体，可以引发对靶抗原的免疫应答，或者是药物 递送载体，将药物递送至细胞，并且，由于其膜组分适于冷冻干燥。 在一个高度优选的实施方案中，病毒体是免疫增强的重建的流感病毒 体(IRIVs )。本专利技术的病毒体膜组合物优选地包括相对病毒体膜的总脂含量 的1.9和37mol。/。之间的DC-Chol或TC-Chol。在一个高度优选的实 施方案中，膜中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物活性组合物，所述组合物包括至少一种免疫增强的重建的流感病毒体（ＩＲＩＶ）和用于所述病毒体高效冷冻干燥和重建的阳离子胆固醇衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：里纳尔多楚尔布里根，马里奥阿马克，西尔维娅拉西，
申请(专利权)人：佩维恩生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]