增强的杂交瘤生成制造技术

本文提供了生成杂交瘤的方法和产生抗原特异性抗体的相关方法

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】增强的杂交瘤生成
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于
2021
年2月5日提交的美国临时申请号
63/146,135
的优先权，该申请的全部内容通过引用并入本文
。

技术介绍

[0003]治疗性抗体构成一类主要的药物，其中许多来源于体内免疫平台，包括人抗体基因座转基因动物，并且依赖于捕获响应于抗原刺激而激活的特定
B
细胞克隆
(Lu
等人
,Journal of Biomedical Science[
生物医学科学杂志
](2020)
第
27
卷
,
文章编号：
1)。
在啮齿动物中对于免疫的体内免疫应答中生成的抗体可以通过来自免疫组织的
B
细胞群体的永生化来捕获，这些免疫组织主要位于脾脏和淋巴结的生发中心
(GC)
内，但也存在于骨髓
、
粘膜相关淋巴组织
(MALT)
和血液循环中
。
永生化过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种生成杂交瘤的方法，该方法包括
a.
从获得自一个或多个免疫的非人动物的次级淋巴器官的细胞制备
IgG
阳性
(IgG+)
记忆
B
细胞的富集群体，其中：
i.
小于或约
10
％的该富集群体是
IgM
阳性
(IgM+)B
细胞，和
/
或
ii.
该富集群体的
IgG+
记忆
B
细胞计数与
IgM+B
细胞计数的比率大于
0.5
，任选地大于1或大于2；
b.
批量培养该富集群体以获得扩增群体；以及
c.
将该扩增群体的细胞与骨髓瘤细胞融合以获得杂交瘤
。2.
如权利要求1所述的方法，该方法进一步包括
(a)
用免疫原对一个或多个非人动物进行免疫，
(b)
任选地在免疫后约3至约5天从该一个或多个免疫的非人动物中收获次级淋巴器官，
(c)
从收获自每个免疫的非人动物的这些次级淋巴器官制备单细胞悬浮液
(SCS)
，和
/
或
(d)
通过将来自多于一个免疫的非人动物的这些次级淋巴器官的
SCS
合并来制备汇集的
SCS。3.
如权利要求1或2所述的方法，其中从获得自这些次级淋巴器官的细胞的单细胞悬浮液制备该
IgG+
记忆
B
细胞的富集群体
。4.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些次级淋巴器官是在免疫后约3至约5天从该一个或多个免疫的非人动物中收获的次级淋巴器官
。5.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些次级淋巴器官是从至少
1、2、3、4、
或5个免疫的非人动物中收获的次级淋巴器官
。6.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些次级淋巴器官是脾脏和
/
或淋巴结
。7.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些次级淋巴器官是仅从选择的免疫非人动物中收获的次级淋巴器官，任选地，其中这些选择的免疫非人动物是基于免疫后的血清抗体滴度水平选择的
。8.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些非人动物是小鼠或大鼠
。9.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该富集群体通过去除
IgM+
细胞和
/
或选择
IgG+
细胞来制备
。10.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该富集群体通过阴性选择
IgM+
细胞和
/
或阳性选择
IgG+
细胞来制备
。11.
如权利要求
10
所述的方法，其中在该阴性选择和
/
或该阳性选择后去除大于
90
％的
IgM+B
细胞，任选地，其中在该阴性选择和
/
或该阳性选择后去除大于
95
％的
IgM+B
细胞
。12.
如权利要求
11
所述的方法，其中在该阴性选择后去除大于
98
％的
IgM+B
细胞，任选地，其中在该阴性选择和该阳性选择后去除大于
99
％的
IgM+B
细胞
。13.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该富集群体通过从这些次级淋巴器官制备的单细胞悬浮液中去除非
B
细胞
、
红细胞
(RBC)、IgM+
细胞
、
或其组合来制备，任选地包括使用对由这些非
B
细胞
、RBC、
或
IgM+
细胞表达的一种或多种细胞表面标志物具有特异性的抗体去除非
B
细胞
、RBC、IgM+
细胞
、
或其组合
。14.
如权利要求
13
所述的方法，其中这些细胞表面标志物是人
IgM、CD90.2、Ly
‑
6G GR.1、NK
‑
1.1、CD3
ε
、CD4、CD8a、CD11b、
和
/
或
TER119。15.
如权利要求
13
或
14
所述的方法，其中这些抗体与生物素连接，并且该方法包括使用
链霉亲和素标记的珠，任选地链霉亲和素标记的磁珠来去除这些非
B
细胞
、RBC、
和
/
或
IgM+
细胞
。16.
如权利要求
15
所述的方法，其中该单细胞悬浮液中存在的大于
98
％的这些
IgM+
细胞被去除
。17.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该富集群体通过任选地使用抗
IgG
抗体标记的珠，任选地抗人
IgG
抗体标记的磁珠选择表面
IgG+
细胞来制备
。18.
如权利要求
17
所述的方法，其中该单细胞悬浮液中存在的大于
99
％的这些
IgM+
细胞被去除，和
/
或其中该
IgG+
记忆
B
细胞计数与
IgM+B
细胞计数的比率增加至少约
50
倍或至少约
100
倍
。19.
如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括在包含兔
T
细胞上清液的细胞培养基中用抗人
IgG
抗体标记的珠和饲养细胞批量培养该
IgG+
细胞的富集群体
。20.
如权利要求
19
所述的方法，其中这些饲养细胞表达
CD40L
和
/
或是经
γ
射线照射的
。21.
如权利要求
20
所述的方法，其中这些饲养细胞是经
γ
射线照射的
CD40L
阳性
EL4B5
饲养细胞
。22.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些骨髓瘤细胞处于对数期生长阶段
。23.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些骨髓瘤细胞是
P3
骨髓瘤细胞
。24.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中批量培养该富集群体以约
350
个
B220
阳性
B
细胞
/mL
至约
700
个
B220
阳性
B
细胞，任选地约
600
个
B220
阳性细胞
/mL
至约
650
个
B220
阳性细胞
/mL
的接种密度开始
。25.
如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该富集群体以至少约
25mL

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：美国安进公司，
类型：发明
国别省市：