鉴定薄皮甜瓜果肉厚度性状的分子标记制造技术

鉴定薄皮甜瓜果肉厚度性状的分子标记

【技术实现步骤摘要】
鉴定薄皮甜瓜果肉厚度性状的分子标记、方法、引物对、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及鉴定薄皮甜瓜果肉厚度性状的分子标记
、
方法
、
引物对
、
试剂盒及其应用，属于分子标记辅助育种

。

技术介绍

[0002]甜瓜
(CucumismeloL.)
为葫芦科甜瓜属一年蔓生草本植物，在我国及世界范围内广泛栽培，是世界上重要的经济作物
。
果肉厚度是甜瓜重要的商品性状，也是甜瓜驯化过程中受到选择的关键性状，野生甜瓜果肉厚度较薄，几乎无可食用的价值，在甜瓜的驯化过程中，由于基因突变和人工选择，甜瓜的果肉厚度逐渐增加，形成目前可以食用的栽培种甜瓜
。
薄皮甜瓜
(Cucumismelossp.agrestis)
成熟期短，品质优异，受到人们的喜爱，挖掘薄皮甜瓜果肉厚度基因，并将其应用于种质资源筛选和分子育种过程具有十分重要的意义
。
[0003]InDel
分子标记是由于染色体序列上存在碱基的缺失和插入形成的一种多态性分子标记，该类标记在基因组中分布广泛，操作简便，结果易于观察，在相同物种不同材料中具有普遍适用性
。
因此，挖掘能够用于薄皮甜瓜果肉厚度性状鉴定的
InDel
分子标记，并将其应用于甜瓜的种质资源筛选和分子育种过程具有十分重要的意义
。

技术实现思路

[0004]为了将分子标记应用于不同果肉厚度薄皮甜瓜种质资源的筛选和基因聚合，获得与薄皮甜瓜果肉厚度紧密连锁的染色体区段及分子标记，进而更快捷地和更准确地在薄皮甜瓜苗期对薄皮甜瓜果肉厚度进行鉴定，本专利技术提供了鉴定薄皮甜瓜果肉厚度性状的分子标记
、
能够用于鉴定薄皮甜瓜果肉厚度性状的引物对
、
试剂盒和方法，具体技术方案如下：
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种与薄皮甜瓜果肉厚度紧密连锁的分子标记，所述分子标记为核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示的
123bp
片段和核苷酸序列如
SEQ ID NO.2
所示的
113bp
片段；所述
SEQ ID NO.1
与薄果肉性状紧密连锁，所述
SEQ ID NO.2
与厚果肉性状紧密连锁
。
[0006]在本专利技术中所述薄果肉性状的果肉厚度范围为
1.75mm
‑
4.53mm
，所述厚果肉性状的果肉厚度范围为
15.65mm
‑
40.04mm。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供引物对在鉴定薄皮甜瓜果肉厚度中的应用，所述引物对包括核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示的上游引物和核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示的下游引物，所述应用为利用引物对扩增薄皮甜瓜基因组
DNA
获得扩增产物，通过检测扩增产物鉴定薄皮甜瓜果肉厚度，若扩增产物为
123bp
的一个片段，则判定具有薄果肉性状；若扩增产物为
113bp
的一个片段，则判定具有厚果肉性状
。
[0008]在本专利技术中所述薄果肉性状的果肉厚度范围为
1.75mm
‑
4.53mm
，所述厚果肉性状的果肉厚度范围为
15.65mm
‑
40.04mm。
[0009]在本专利技术的一种实施例中，所述甜瓜基因组
DNA
取自幼苗期
、
抽蔓期或结果期的任
一一个时期
。
[0010]在本专利技术的一种实施例中，所述检测扩增产物利用聚丙烯酰氨凝胶电泳
。
[0011]本专利技术的第三个目的是提供一种鉴定薄皮甜瓜果肉厚度的方法，包括如下步骤：
[0012](1)
提取待测薄皮甜瓜的基因组
DNA
；
[0013](2)
以步骤
(1)
获得的基因组
DNA
为模板，利用引物对进行
PCR
扩增，获得扩增产物，通过检测扩增产物鉴定薄皮甜瓜果肉厚度，若扩增产物为
123bp
的一个片段，则判定具有薄果肉性状；若扩增产物为
113bp
的一个片段，则判定具有厚果肉性状；所述引物对包括核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示的上游引物和核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示的下游引物
。
[0014]在本专利技术中所述薄果肉性状的果肉厚度范围为
1.75mm
‑
4.53mm
，所述厚果肉性状的果肉厚度范围为
15.65mm
‑
40.04mm。
[0015]在本专利技术的一种实施例中，步骤
(2)
所述检测扩增产物利用聚丙烯酰氨凝胶电泳
。
[0016]本专利技术的第四个目的是提供上述方法在薄皮甜瓜果肉厚度性状辅助鉴定
、
辅助育种及薄皮甜瓜果肉厚度性状筛选中的应用
。
[0017]本专利技术的第五个目的是提供一种用于鉴定薄皮甜瓜果肉厚度性状的试剂盒，所述试剂盒含有引物对；所述引物对包括核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示的上游引物和核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示的下游引物
。
[0018]本专利技术的第六个目的是提供一种上述试剂盒的使用方法，所述使用方法为利用所述引物对对薄皮甜瓜基因组
DNA
进行扩增，获得扩增产物，根据扩增产物的片段大小来鉴定薄皮甜瓜果肉厚度，具体为若扩增产物为
123bp
的一个片段，则判定具有薄果肉性状；若扩增产物为
113bp
的一个片段，则判定具有厚果肉性状
。
[0019]在本专利技术中所述薄果肉性状的果肉厚度范围为
1.75mm
‑
4.53mm
，所述厚果肉性状的果肉厚度范围为
15.65mm
‑
40.04mm。
[0020]本专利技术的第七个目的是提供上述的试剂盒在薄皮甜瓜果肉厚度性状辅助鉴定
、
辅助育种及薄皮甜瓜果肉厚度性状筛选中的应用
。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]本专利技术前期通过构建以薄果肉和厚果肉甜瓜为亲本的遗传群体，利用基因组重测序和
Graded
‑
seq
技术获得与薄皮甜瓜果肉厚度紧密连锁的染色体区段，通过在遗传群体中进行一年两季验证，获得稳定的主效定位区间，将其命名为
qft11.1
，在该主效染色体区段内开发
InDel<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种与薄皮甜瓜果肉厚度紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记为核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示的
123bp
片段和核苷酸序列如
SEQ ID NO.2
所示的
113bp
片段；所述
SEQ ID NO.1
与薄果肉性状紧密连锁，所述
SEQ ID NO.2
与厚果肉性状紧密连锁；所述薄果肉性状的果肉厚度为
1.75
‑
4.53mm
，厚果肉性状的果肉厚度为
15.65
‑
40.04mm。2.
引物对在鉴定薄皮甜瓜果肉厚度中的应用，其特征在于，所述引物对包括如
SEQ ID NO.3
所示的上游引物和如
SEQ ID NO.4
所示的下游引物，所述应用为利用引物对扩增薄皮甜瓜基因组
DNA
获得
PCR
产物，通过检测
PCR
产物鉴定薄皮甜瓜果肉厚度，若
PCR
产物为
123bp
的一个片段，则判定具有薄果肉性状；若
PCR
产物为
113bp
的一个片段，则判定具有厚果肉性状，所述薄果肉性状的果肉厚度为
1.75
‑
4.53mm
，厚果肉性状的果肉厚度为
15.65
‑
40.04mm。3.
根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述甜瓜基因组
DNA
取自幼苗期
、
抽蔓期或结果期的任一一个时期
。4.
根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测
PCR
产物利用聚丙烯酰氨凝胶电泳
。5.
一种鉴定薄皮甜瓜果肉厚度的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)
提取待测薄皮甜瓜的基因组

【专利技术属性】
技术研发人员：刘识，栾非时，刘宏宇，朱子成，高鹏，王学征，马鸿艳，杜黎黎，刘树森，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：